| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-28页 |
| 1．1 植物病原细菌概述 | 第11-16页 |
| 1．1．1 土壤杆菌属 | 第12页 |
| 1．1．2 欧文氏菌属 | 第12-13页 |
| 1．1．3 假单胞菌属 | 第13页 |
| 1．1．4 罗尔斯通氏菌 | 第13-14页 |
| 1．1．5 黄单胞菌属 | 第14页 |
| 1．1．6 木质部小菌属 | 第14-15页 |
| 1．1．7 泛生菌属 | 第15页 |
| 1．1．8 棒状杆菌属 | 第15-16页 |
| 1．2 植物病原细菌的致病因子和致病基因 | 第16-27页 |
| 1．2．1 植物病原细菌的致病因子及编码致病因子的基因 | 第16-22页 |
| 1．2．1．1 胞外多糖 | 第16-17页 |
| 1．2．1．2 脂多糖 | 第17-18页 |
| 1．2．1．3 胞外酶 | 第18页 |
| 1．2．1．4 植物毒素 | 第18-19页 |
| 1．2．1．5 三型分泌的效应物 | 第19-22页 |
| 1．2．2 致病相关基因─致病因子合成的调控，加工，分泌，以及转运的基因 | 第22-27页 |
| 1．2．2．1 EPS产生相关基因 | 第22-23页 |
| 1．2．2．2 LPS产生相关基因 | 第23页 |
| 1．2．2．3 胞外酶产生相关基因 | 第23-24页 |
| 1．2．2．4 毒素产生相关基因 | 第24-25页 |
| 1．2．2．5 III型分泌系统 | 第25-27页 |
| 1．3 野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病机理的研究进展 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-53页 |
| 2．1 供试菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2．2 本研究所用的引物 | 第29-30页 |
| 2．3 常用抗生素 | 第30-31页 |
| 2．4 细菌培养基 | 第31-32页 |
| 2．5 菌株培养条件及保存 | 第32页 |
| 2．6 细菌生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2．7 胞外多糖的检测 | 第32页 |
| 2．8 胞外酶的检测 | 第32-33页 |
| 2．9 致病性检测 | 第33页 |
| 2．10 从叶片中回收被接种的细菌 | 第33页 |
| 2．11 高敏反应检测 | 第33页 |
| 2．12 β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性的检测 | 第33-34页 |
| 2．13 三亲本接合 | 第34-35页 |
| 2．14 两亲本接合 | 第35页 |
| 2．15 质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2．16 Xcc总DNA的提取 | 第36页 |
| 2．17 DNA的纯化 | 第36页 |
| 2．18 DNA的酶切、电泳及 DNA片段浓度、大小测算 | 第36-37页 |
| 2．19 DNA片段的回收 | 第37-38页 |
| 2．19．1 低熔点琼脂糖凝胶法 | 第37页 |
| 2．19．2 透析法回收DNA片段 | 第37-38页 |
| 2．20 载体脱磷酸化处理 | 第38页 |
| 2．21 DNA连接 | 第38-39页 |
| 2．22 质粒DNA的转化 | 第39-40页 |
| 2．22．1 快速制备E．coli的感受态细胞-CaCl_2法 | 第39页 |
| 2．22．2 转化反应 | 第39页 |
| 2．22．3 质粒DNA的电脉冲转化 | 第39-40页 |
| 2．23 PCR扩增反应 | 第40-41页 |
| 2．23．1 常规 PCR反应 | 第40页 |
| 2．23．2 融合 PCR反应 | 第40页 |
| 2．23．3 反转录 PCR(RT-PCR) | 第40-41页 |
| 2．24 提取G-细菌总RNA | 第41-42页 |
| 2．24．1 提取总 RNA前的准备及注意事项 | 第41-42页 |
| 2．24．2 从G-细菌中提取总 RNA操作步骤 | 第42页 |
| 2．25 芯片杂交的方法 | 第42页 |
| 2．26 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的制备 | 第42-43页 |
| 2．27 蛋白的表达，纯化及酶活性检测 | 第43-44页 |
| 2．27．1 蛋白质的表达 | 第43页 |
| 2．27．2 蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 2．27．3 GpdA的酶活性检测 | 第44页 |
| 2．28 突变体的构建 | 第44-49页 |
| 2．28．1 Xcc的Tn5gusA5插入突变体的构建 | 第44页 |
| 2．28．2 Xcc标记置换突变体的构建 | 第44-45页 |
| 2．28．3 Xcc定点整合突变体的构建 | 第45-49页 |
| 2．28．4 Xcc缺失突变体构建 | 第49页 |
| 2．29 突变体的互补 | 第49页 |
| 2．30 常用溶液与缓冲液 | 第49-53页 |
| 第三章 致病力下降的Tn5gusAS插入突变体中突变位点与致病力下降的关系 | 第53-58页 |
| 3．1 引言 | 第53页 |
| 3．2 结果 | 第53-57页 |
| 3．3 讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 marR家族转录调控子hgiA受hrpG和hrpX调控并参与野油菜黄单胞菌野油菜致病变种的致病过程 | 第58-74页 |
| 4．1 引言 | 第58-59页 |
| 4．2 结果 | 第59-72页 |
| 4．2．1 hgjA非极性突变体的构建 | 第59-60页 |
| 4．2．2 NK2827的互补 | 第60-61页 |
| 4．2．3 hgiA是Xcc致病所需要的 | 第61-62页 |
| 4．2．4 NK2827在不同寄主植物上的致病力的差异 | 第62-64页 |
| 4．2．5 NK2827能够产生正常的 HR反应 | 第64-65页 |
| 4．2．6 hgiA突变不影响Xcc在培养基上的生长 | 第65-66页 |
| 4．2．7 hgiA突变不影响已知致病因子的产生 | 第66-67页 |
| 4．2．8 hgiA是一个独立的转录单位 | 第67页 |
| 4．2．9 hgiA基因的表达在丰富培养基上受到抑制，而在基本培养基和植物体内受到诱导 | 第67-69页 |
| 4．2．10 hgiA在基本培养基及植物体内的诱导表达依赖hrpG和hrpX | 第69-71页 |
| 4．2．11 hgiA调控元的鉴定 | 第71-72页 |
| 4．3 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 以NAD(P)为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶是野油菜黄单胞菌野油菜致病变种致病所需要的 | 第74-89页 |
| 5．1 引言 | 第74-75页 |
| 5．2 结果 | 第75-88页 |
| 5．2．1 gpdA非极性突变体的构建 | 第75-76页 |
| 5．2．2 NK0214的互补 | 第76-77页 |
| 5．2．3 gpdA是Xcc致病所需要的 | 第77-78页 |
| 5．2．4 gpdA是Xcc在寄主植物叶内生长所需要的 | 第78页 |
| 5．2．5 gpdA突变不影响Xcc的HR反应 | 第78-79页 |
| 5．2．6 gpdA的突变影响Xcc在基本培养基上的生长 | 第79-81页 |
| 5．2．7 gpdA基因编码的产物具有3-磷酸甘油脱氢酶的活性 | 第81-82页 |
| 5．2．8．1 蛋白质表达质粒pET0214的构建 | 第81页 |
| 5．2．8．2 GPDH(3-磷酸甘油脱氢酶)蛋白质的表达，纯化及酶活性检测 | 第81-82页 |
| 5．2．9 以FAD为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶基因glpD在Xcc致病过程中没有作用 | 第82-85页 |
| 5．2．8 Xcc可能存在另一个编码NAD为辅酶的3-磷酸甘油脱氢酶的基因 | 第85-88页 |
| 5．3 讨论 | 第88-89页 |
| 第六章 CsrA在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种中是一个全局调控子 | 第89-106页 |
| 6．1 引言 | 第89-90页 |
| 6．2 结果 | 第90-104页 |
| 6．2．1 不同种属细菌中CsrA氨基酸序列的保守性 | 第90页 |
| 6．2．2 csrA非极性突变体的构建 | 第90-92页 |
| 6．2．3 csrA突变体NK2506的互补 | 第92-93页 |
| 6．2．4 csrA突变不影响Xcc在培养基上的生长 | 第93-94页 |
| 6．2．5 csrA是Xcc致病所需要的 | 第94-95页 |
| 6．2．6 csrA是引发HR反应所需要的 | 第95-96页 |
| 6．2．7 csrA突变对已知致病因子的产生的影响 | 第96-97页 |
| 6．2．8 csrA负调控糖原合成 | 第97页 |
| 6．2．9 csrA可能负调控生物膜的形成 | 第97-98页 |
| 6．2．10 csrA正调控细胞的运动性 | 第98页 |
| 6．2．11 csrA调控元分析 | 第98-104页 |
| 6．3 讨论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
