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黄瓜根围病原菌与拮抗菌的生态学及PGPR诱导抗性机制的研究

致谢第1-11页
摘要第11-13页
Abstract第13-15页
第一篇 文献综述第15-45页
 第一章 植物与微生物的互作和微生物生态研究第15-24页
  1 根系分泌物对微生物的影响第15-17页
  2 微生物对植物的影响第17-19页
  3 引起黄瓜土传病害的重要病原菌及生态研究第19-21页
   ·腐霉菌及其生态学研究第19-20页
   ·引起黄瓜枯萎病的尖孢子镰刀菌及其生态学研究第20-21页
  4 拮抗菌及其生态学研究第21-24页
   ·拮抗菌的种类第22-23页
   ·拮抗菌在根围与叶围的定殖第23页
   ·影响拮抗细菌种群变化的因子第23-24页
 第二章 植物病害生物防治的研究概况第24-27页
 第三章 植物病害生物防治的研究现状第27-31页
   ·生防真菌的开发利用第28-29页
     ·木霉属真菌第28页
     ·毛壳属真菌第28-29页
     ·酵母菌第29页
     ·淡紫拟青霉菌、厚壁孢子轮枝菌及节从菌属真菌第29页
     ·菌根真菌第29页
   ·生防细菌的开发利用第29-30页
     ·植物促生菌(Plant growth-promoting rhizobacteria,简称PGPR)第29-30页
     ·放射性土壤农杆菌属(Agrobacterium)第30页
     ·巴氏杆菌(Pasteurella)第30页
   ·放线菌(Actinomycetes)的开发利用第30页
   ·病原菌无致病力菌株的开发利用第30页
   ·病毒的弱毒株系第30-31页
 第四章 PGPR的作用机制的研究第31-42页
   ·PGPR促进植物生长的机制第31-33页
     ·植物生长调节作用第31-33页
     ·促进植物的营养功能来促进植物生长第33页
     ·抑制微效病原菌间接促进植物生长第33页
   ·PGPR生物防治的机制第33-42页
     ·抗生作用(Antibiosis)第34-35页
     ·营养与空间的竞争第35-39页
       ·营养的竞争第36-37页
       ·空间的竞争第37-39页
     ·重寄生(Parasitism)第39页
     ·诱导系统抗性(ISR)第39-42页
     ·抗真菌代谢活动第42页
   ·.6 产生抗真菌酶类第42页
 第五章 目前生物防治中存在的问题及其对策第42-45页
   ·生防菌在植物病害防治中存在的问题第43页
     ·生防菌在田间自然条件下定殖能力差第43页
     ·生防菌的抗药能力差第43页
     ·菌株稳定性问题第43页
   ·解决生防菌在植物病害防治中存在问题的对策第43-44页
   ·展望第44-45页
第二篇 研究报告第45-115页
 第一章 黄瓜根际重要病原与其拮抗菌消长规律的研究第45-52页
  1 材料与方法第45-47页
   ·供试材料第45-46页
     ·供试黄瓜品种第45页
     ·目标病原菌株第45-46页
     ·培养基第46页
     ·土样的采集第46页
   ·研究方法第46-47页
     ·试验地设计第46页
     ·根际土壤悬浮液制备第46页
     ·病原菌分离、培养和纯化第46-47页
       ·病原菌(Pythium spp.)分离、培养和纯化第46-47页
       ·病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)分离、培养和纯化第47页
     ·拮抗菌筛选、培养和纯化第47页
     ·数据分析方法第47页
  2 结果第47-50页
   ·不同生育期根围腐霉种群数量变化第47-48页
   ·不同生育期根围尖孢镰刀菌种群数量变化第48-49页
   ·根围病原菌(Pythium spp.& Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)种群数量与其拮抗菌的相互关系第49-50页
  3 讨论第50-52页
 第二章 黄瓜PGPR的分离筛选及对黄瓜苗期病害生物防治的研究第52-63页
  1 材料与方法第53-56页
   ·材料第53页
     ·土样的采集第53页
     ·供试黄瓜品种第53页
     ·目标病原菌株第53页
     ·培养基第53页
   ·试验方法第53-56页
     ·黄瓜根围细菌的分离第53-54页
     ·PGPR菌株筛选第54-56页
       ·促生筛选法:第54-55页
       ·抑菌圈筛选法:第55页
       ·PGPR筛选菌株用于田间试验第55-56页
  2 结果与分析第56-60页
   ·根围细菌的分离第56页
   ·PGPR菌株的筛选第56-60页
     ·促生筛选法:第56-59页
     ·PGPR筛选菌株生防效果的田间试验第59-60页
  3 讨论第60-63页
   ·关于生防细菌的筛选第60-61页
   ·PGPR与植物病害生物防治第61-63页
 第三章 PGPR菌株的分类鉴定第63-78页
  1 材料与方法第63-70页
   ·材料第63-64页
     ·供试菌株第63页
     ·试剂第63页
     ·引物合成第63-64页
   ·方法第64-70页
     ·菌株CH1、CH2和CH3形态特征观察和生理生化指标(Buchanan et al.,1984;方中达,1998)测定。第64-67页
       ·格兰氏染色第64页
       ·鞭毛的观察第64页
       ·荧光色素观察第64页
       ·芽孢染色第64-65页
       ·氧化酶反应第65页
       ·接触酶反应第65页
       ·好氧性和厌氧性第65页
       ·碳水化合物发酵第65页
       ·淀粉水解第65-66页
       ·精氨酸双水解第66页
       ·明胶液化第66页
       ·V-P测定第66页
       ·7%NaCl耐盐生长第66页
       ·反硝化第66页
       ·柠檬酸盐的利用第66-67页
       ·丙二酸盐的利用第67页
     ·菌株CH1和CH2基因组DNA的提取(Sambrook et al,2002)第67页
     ·16S rDNA基因序列的克隆第67-68页
     ·PCR产物的纯化与回收(参照产品说明书)第68页
     ·克隆与筛选第68-70页
       ·16S rDNA基因片段与克隆质粒pGEM-T Vector连接(参照产品说明书)第68-69页
       ·感受态细胞的制备(Sambrook et al,2002)第69页
       ·连接产物的转化(Sambrook et al,2002)第69页
       ·碱裂解法少量提取质粒(Sambrook et al,2002)第69-70页
       ·酶切鉴定阳性克隆第70页
       ·16S rDNA序列测定及分析第70页
  2.结果第70-75页
   ·形态学特征第70-71页
   ·部分生理生化特征第71-72页
   ·菌株CH1和CH2的16S rDNA序列扩增及阳性克隆的鉴定第72页
   ·16S rDNA序列测定及分析第72-75页
  3 讨论第75-78页
 第四章 促生菌CH1诱导黄瓜抗猝倒病过程中对活性氧清除系统的影响第78-89页
  1 材料与方法第78-81页
   ·供试材料与接种处理第78-80页
     ·供试品种第78页
     ·供试菌株第78-79页
     ·病原菌接种体的制备第79页
     ·CH1细菌悬浮液的制备第79页
     ·黄瓜植株的准备第79页
     ·分根试验第79页
     ·接种处理第79页
     ·CH1诱导接种第79-80页
     ·病原菌挑战接种第80页
   ·实验方法第80-81页
     ·丙二醛(MDA)含量测定第80页
     ·超氧阴离子产生速率测定第80页
     ·H_2O_2含量测定第80-81页
     ·超氧化物歧化酶(SOD)测定第81页
     ·过氧化物酶(POD)测定第81页
     ·过氧化氢酶(CAT)测定第81页
  2 结果与分析第81-86页
   ·促生菌CH1处理黄瓜对猝倒病的诱抗效果第81-82页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部MDA活性的变化第82页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部超氧阴离子产生速率的变化第82-83页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部H_2O_2含量的变化第83-84页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部SOD活性的变化第84-85页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部POD活性的变化第85页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部CAT活性的变化第85-86页
  3 讨论第86-89页
 第五章 促生菌诱导黄瓜对猝倒病的抗性时对黄瓜幼苗生长及品质和影响第89-97页
  1 材料与方法第89-92页
   ·供试材料与接种处理第89-90页
     ·供试品种第89页
     ·供试菌株第89页
     ·CH1细菌悬浮液的制备第89页
     ·黄瓜植株的准备第89-90页
   ·实验方法第90-92页
     ·促芽测定第90页
     ·生长测定第90页
     ·生理指标测定第90-92页
       ·超氧阴离子产生速率测定第90-91页
       ·H_2O_2含量测定第91页
       ·丙二醛(MDA)含量测定第91页
       ·叶片叶绿素含量第91页
       ·蛋白质含量测定第91页
       ·可溶性糖含量测定第91-92页
       ·Vc含量测定第92页
  2 结果与分析第92-93页
   ·促芽生长平皿试验第92页
   ·植物促生菌CH1对黄瓜生长的影响第92-93页
   ·植物促生菌CH1与CH2对黄瓜幼苗组织中叶绿素、蛋白质、可溶性糖和Vc含量的影响第93页
   ·植物促生菌CH1与CH2对黄瓜幼苗组织中超氧阴离子产生速率、H_2O_2和丙二醛(MDA)含量的影响第93页
  3 讨论第93-97页
 第六章 促生菌对黄瓜酚类物质代谢的影响及与抗猝倒病的关系第97-107页
  1 材料与方法第98-100页
   ·材料及处理第98页
     ·供试品种第98页
     ·供试菌株第98页
   ·试验处理第98页
   ·测定方法第98-100页
     ·苯丙氨酸解氨酶(PAL)测定第98-99页
     ·多酚氧化酶(PPO)测定第99页
     ·阿魏酸的测定第99页
     ·绿原酸的测定第99页
     ·木质素含量测定第99-100页
     ·酚类物质含量的测定第100页
     ·类黄酮含量测定第100页
  2 结果与分析第100-105页
   ·硅处理对黄瓜叶片PAL活性的影响第100-101页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部PPO活性的变化第101页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部阿魏酸含量的变化第101-102页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部绿原酸含量的变化第102-103页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部木质素含量的变化第103-104页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部总酚含量的变化第104页
   ·CH1处理后黄瓜幼苗根部与叶部类黄酮含量的变化第104-105页
  3 讨论第105-107页
 第七章 根围促生菌CH1诱导黄瓜抗炭疽病的研究第107-115页
  1 材料与方法第107-110页
   ·材料第107-108页
     ·供试黄瓜品种第107页
     ·诱导菌株第107页
     ·挑战病原菌株第107-108页
   ·方法第108-110页
     ·诱导物细菌悬浮液的制备第108页
     ·病菌培养第108页
     ·黄瓜植株的准备第108页
     ·诱导处理第108页
     ·挑战接菌第108页
     ·PGPR菌株CH1对黄瓜炭疽病菌的平板测定第108-109页
     ·不同PGPR菌株对黄瓜炭疽病的诱导第109页
     ·促生菌CH1不同处理方法对诱导黄瓜抗炭疽病的影响第109页
     ·促生菌诱处理后抗炭疽病的持效期的测定第109页
     ·几丁质酶活性测定第109页
     ·β-1,3-葡聚糖酶活性变化第109-110页
  2 结果与分析第110-112页
   ·PGPR菌株CH1对黄瓜炭疽病菌的平板测定第110页
   ·不同PGPR菌株对黄瓜炭疽病的诱导第110页
   ·促生菌CH1不同处理方法对诱导黄瓜抗炭疽病的影响第110-111页
   ·促生菌CH1诱导黄瓜抗炭疽病持效期的测定第111-112页
   ·CH1处理后接种炭疽病菌的黄瓜根部与叶部中几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性变化第112页
  3 讨论第112-115页
参考文献第115-128页
全文小结第128-130页
附录A 主要培养基第130-132页
附录B 主要溶液与试剂第132-134页
附录C 菌株CH1和CH216S rDNA序列的Blast结果第134-136页

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