代谢工程与基因组重排相结合构建高浓度乙醇发酵酿酒酵母菌株
| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 材料与方法 | 第16-34页 |
| 1 菌株与质粒 | 第16页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·质粒 | 第16页 |
| 2 培养基 | 第16-17页 |
| ·YPD培养基 | 第16页 |
| ·产孢培养基(McClary) | 第16页 |
| ·SD培养基 | 第16页 |
| ·酒母培养基及发酵培养基 | 第16-17页 |
| ·YAPD培养基 | 第17页 |
| ·LB培养基 | 第17页 |
| 3 主要试剂及溶液 | 第17-20页 |
| 4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 5 实验方法 | 第21-34页 |
| ·发酵性能比较 | 第21页 |
| ·高浓度发酵工艺 | 第21页 |
| ·发酵液组分分析 | 第21页 |
| ·DNA分子操作 | 第21-26页 |
| ·小量质粒提取 | 第21-22页 |
| ·酵母基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第23页 |
| ·目的条带的割胶回收 | 第23-24页 |
| ·DNA与质粒的连接 | 第24页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第24-25页 |
| ·酵母细胞醋酸锂法转化 | 第25-26页 |
| ·全基因组重排 | 第26页 |
| ·单倍体分离 | 第26页 |
| ·重排 | 第26页 |
| ·细胞膜完整性 | 第26-27页 |
| ·脂肪酸组成分析 | 第27页 |
| ·麦角固醇 | 第27页 |
| ·海藻糖 | 第27-31页 |
| ·酵母细胞内海藻糖的测定 | 第27-28页 |
| ·海藻糖相关酶活的测定 | 第28-31页 |
| ·荧光定量PCR | 第31-34页 |
| ·酵母RNA提取 | 第31页 |
| ·RNA反转录 | 第31-32页 |
| ·定量PCR反应体系及程序 | 第32-34页 |
| 结果与分析 | 第34-53页 |
| 1 基因组重排及基因敲除方法筛选菌株 | 第34-39页 |
| ·出发菌株Z5的选择 | 第34页 |
| ·代谢工程与基因组重排相结合筛选菌株 | 第34-39页 |
| ·构建菌株Z5△GPD2 | 第35-37页 |
| ·发酵性能比较 | 第37-39页 |
| 2 菌株发酵性能差异原因分析 | 第39-53页 |
| ·细胞存活数及细胞膜完整性 | 第39-40页 |
| ·酒精耐性分析 | 第40-43页 |
| ·菌株在乙醇胁迫下的生长比较 | 第40-41页 |
| ·核酸泄露 | 第41-43页 |
| ·乙醇耐受性差异机制的探讨 | 第43-53页 |
| ·细胞膜组分 | 第43-44页 |
| ·海藻糖 | 第44-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 文献综述 | 第61-79页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 作者简介 | 第79页 |
