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番茄RNA病毒寄主因子基因TTOM1的克隆与功能鉴定

第一章 前言第1-27页
   ·以番茄为寄主的RNA病毒的主要种类第8-9页
   ·植物本身的抗病毒性质第9-12页
     ·水扬酸诱导的植物系统获得性抗性第9-10页
     ·植物的抗病毒性恢复第10-11页
     ·dsRNA诱导的抗病毒性第11-12页
   ·利用来源于病毒自身的基因或基因的调控系统来获得抗病毒性植株第12-19页
     ·将病毒的外壳蛋白或核衣壳基因导入植物而获得抗病毒能力第12-14页
     ·将复制酶基因导入植物获得抗病毒能力第14-15页
     ·利用运动蛋白介导植物获得抗病毒能力第15-16页
     ·利用核酶介导的抗性来得到转基因植物第16页
     ·利用病毒的非翻译序列来获得抗病毒植株第16-17页
     ·利用病毒卫星RNA介导的抗病性第17-18页
     ·利用RNA干扰获得转基因植物第18-19页
   ·植物的抗病毒基因和病毒的寄主因子基因第19-22页
     ·植物的抗病毒基因第19-20页
     ·支持病毒复制的寄主因子基因第20-21页
     ·S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因第21-22页
     ·真核生物的延长因子1A基因第22页
     ·其他已发现的与病毒复制有关的植物寄主因子第22页
   ·转基因植物的构建方法第22-25页
     ·农杆菌介导的转化法第22-25页
     ·基因枪轰击法第25页
     ·花粉管导入法第25页
   ·转基因植物中外源基因的遗传行为第25-26页
     ·外源基因在转基因当代植物中的整合与表达多样性第26页
     ·外源基因在后代植株中的遗传多样性第26页
   ·本研究工作的目的意义第26-27页
第二章 材料与方法第27-42页
   ·本实验所用细菌菌株、培养基及其它溶液的种类与组成第27-31页
     ·细菌菌株与质粒第27页
     ·培养基第27-28页
     ·溶液的配制第28-31页
   ·基因克隆及分子操作第31-39页
     ·番茄总RNA的提取纯化第31页
     ·番茄总DNA的提取第31-32页
     ·感受态细菌的制备第32页
     ·质粒的热转化第32-33页
     ·质粒的提取第33页
     ·用三亲结合的方法向农杆菌导入目的质粒第33-34页
     ·内切酶反应与连接反应第34页
     ·cDNA的合成第34-37页
     ·PCR反应第37页
     ·凝胶电泳第37页
     ·从凝胶中回收目的DNA片段第37-38页
     ·Southern杂交第38-39页
   ·转基因番茄植株的获得第39-40页
     ·Flamingo-Bill外植体的制备第39-40页
     ·用农杆菌感染外植体第40页
     ·分化诱导第40页
     ·转基因植株的生根诱导第40页
     ·盆栽第40页
   ·接种试验第40-42页
     ·黄瓜花叶病毒(CMV)的保存第40-41页
     ·接种转基因番茄第41页
     ·CMV的枯斑寄主生物定量测定第41-42页
第三章 结果与分析第42-67页
   ·番茄全长TTOM1基因cDNA的克隆第42-52页
     ·番茄总RNA的浓度及质量第42-43页
     ·TTOM1全长cDNA的获得第43-52页
   ·转基因用TTOM1基因片段的克隆第52-55页
     ·TTOM1基因片段的获得第52-55页
   ·植物表达载体的构建第55-59页
     ·将TTOM1反义片段克隆到表达载体中第56-58页
     ·将转化质粒导入农杆菌菌株中第58-59页
   ·不同激素及其配比对番茄Flamingo-bill外植体分化效率的影响第59-62页
     ·激素比例的确定第59-60页
     ·用农杆菌感染外植体后的分化效率第60页
     ·不同浓度的头孢霉素与羧苄青霉素对农杆菌生长的影响第60页
     ·Flamingo-Bill外植体对卡那霉素的敏感性第60-62页
   ·转基因植株的分子鉴定第62-64页
     ·PCR鉴定第62-63页
     ·转基因植株中的株系Southern杂交分析第63-64页
   ·转反义TTOM1植株的抗病性第64-67页
     ·症状表现第64-66页
     ·转基因番茄的病毒相对量第66-67页
第四章 讨论第67-71页
   ·番茄TTOM1基因第67页
   ·转反义TTOM1基因的番茄抗CMV病毒的性能第67-68页
   ·不同番茄外植体对农杆菌介导的遗传转化效率的影响第68-70页
   ·结论第70-71页
参考文献第71-78页
附录: 实验中用到的仪器第78-79页
致谢第79页

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