| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一章 大豆GmNHX1 基因的克隆、表达及功能初探 | 第14-34页 |
| 1 引言 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-24页 |
| ·试验材料 | 第15-17页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·菌株和载体 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·酶及化学试剂 | 第15页 |
| ·培养基及营养液配方 | 第15-17页 |
| ·基因克隆及表达分析 | 第17-21页 |
| ·材料处理及取样 | 第17页 |
| ·RNA 提取 | 第17页 |
| ·总RNA 浓度、纯度及完整度检测 | 第17-18页 |
| ·反转录 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·GmNHX1 的PCR 扩增 | 第18-19页 |
| ·PCR 产物回收 | 第19页 |
| ·CaC1_2 法制备大肠杆菌DH5α的感受态细胞 | 第19-20页 |
| ·PCR 产物与克隆载体的连接和转化 | 第20页 |
| ·阳性克隆的蓝白斑筛选 | 第20页 |
| ·质粒提取 | 第20页 |
| ·双酶切质粒鉴定 | 第20-21页 |
| ·测序分析 | 第21页 |
| ·生物信息学分析 | 第21页 |
| ·GmNHX1 基因过表达拟南芥植株的获得及表型鉴定 | 第21-24页 |
| ·双元表达载体构建 | 第21-22页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第22页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第22页 |
| ·拟南芥的种植与转化 | 第22-23页 |
| ·转基因种子的收获以及转基因苗的筛选与鉴定 | 第23页 |
| ·过表达植株耐盐表型的验证 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-32页 |
| ·大豆Na+/H+逆向转运蛋白基因的克隆 | 第24页 |
| ·大豆GmNHX1 基因编码的蛋白质特征及系统进化分析 | 第24-27页 |
| ·大豆GmNHX1 基因对盐胁迫的应答特征 | 第27-28页 |
| ·GmNHX1 基因过表达拟南芥植株的获得及功能鉴定 | 第28-32页 |
| ·目的片段的获得 | 第28页 |
| ·转化载体的构建 | 第28-29页 |
| ·pCAMBIA1300-35S::GmNHX1-eYFP 载体的农杆菌转化 | 第29-30页 |
| ·拟南芥的农杆菌转化及阳性植株的筛选和鉴定 | 第30-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 5 结论 | 第33-34页 |
| 第二章 大豆胚尖再生体系的优化及GmNHX1 的遗传转化 | 第34-50页 |
| 1 引言 | 第34-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-39页 |
| ·试验材料与处理 | 第36页 |
| ·试验材料 | 第36页 |
| ·外植体材料的获得和处理 | 第36页 |
| ·培养条件 | 第36页 |
| ·转化大豆Basta 筛选条件的摸索 | 第36-37页 |
| ·生根筛选 | 第36-37页 |
| ·温室培养筛选 | 第37页 |
| ·农杆菌介导的GmNHX1 基因的大豆遗传转化 | 第37-39页 |
| ·菌株和载体 | 第37页 |
| ·双元表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·胚尖转化过程 | 第38页 |
| ·大豆基因组的提取方法 | 第38页 |
| ·GmNHX1 基因的PCR 检测 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-47页 |
| ·6-BA 和TDZ 对大豆胚尖再生的影响 | 第39-40页 |
| ·不同浓度6-BA 和TDZ 对不同基因型大豆胚尖出芽率的影响 | 第39-40页 |
| ·不同浓度6-BA 和TDZ 对不同基因型大豆胚尖平均丛生芽数的影响 | 第40页 |
| ·不同浓度6-BA 和TDZ 对不同基因型大豆胚尖再生率的影响 | 第40页 |
| ·转化大豆Basta 筛选条件的摸索 | 第40-44页 |
| ·不同浓度Basta 对大豆生根率的影响 | 第40-41页 |
| ·不同浓度Basta 对植株生根状况的影响 | 第41-42页 |
| ·不同浓度Basta 对温室培养大豆苗的影响 | 第42-44页 |
| ·农杆菌介导的GmNHX1 基因的大豆遗传转化 | 第44-47页 |
| ·目的片段的获得 | 第44页 |
| ·pCAMBIA3301-35S::GmNHX1 载体的构建及农杆菌转化 | 第44-45页 |
| ·pCAMBIA3301-35S::GmNHX1 的大豆遗传转化 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| ·6-BA 和TDZ 对大豆胚尖再生的影响 | 第47页 |
| ·大豆遗传转化的Basta 筛选浓度 | 第47-48页 |
| ·大豆过表达GmNHX1 的功能探讨 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
