| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-21页 |
| 1．1 金龟子绿僵菌蛋白酶的研究进展 | 第9-12页 |
| 1．1．1 侵染过程 | 第9-10页 |
| 1．1．2 蛋白酶的种类 | 第10-11页 |
| 1．1．3 蛋白酶的协同作用 | 第11-12页 |
| 1．1．4 蛋白酶的调控表达 | 第12页 |
| 1．1．5 丝氨酸蛋白酶（Pr1）为致病的决定因子 | 第12页 |
| 1．2 食线虫真菌蛋白酶研究现状 | 第12-17页 |
| 1．2．1 侵染过程 | 第13-14页 |
| 1．2．2 蛋白酶在侵入过程中的作用 | 第14页 |
| 1．2．3 食线虫真菌侵染相关酶的研究现状 | 第14-17页 |
| 1．2．3．1 丝氨酸蛋白酶类 | 第14-16页 |
| 1．2．3．2 胶原蛋白酶 | 第16-17页 |
| 1．2．3．3 几丁质酶 | 第17页 |
| 1．2．3．4 纤维素酶 | 第17页 |
| 1．3 食线虫真菌—被毛孢（Hirsutelia spp．） | 第17-19页 |
| 1．3．1 线虫的危害 | 第17-18页 |
| 1．3．2 食线虫菌物在线虫防治中的重要作用 | 第18页 |
| 1．3．3 食线虫被毛孢 | 第18-19页 |
| 1．4 研究意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2．1 材料 | 第21-22页 |
| 2．1．1 菌株 | 第21页 |
| 2．1．2 培养基 | 第21页 |
| 2．1．3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2．2 酶的提取和纯化 | 第22-24页 |
| 2．2．1 产酶曲线 | 第22页 |
| 2．2．2 粗酶液的提取 | 第22页 |
| 2．2．3 离子交换层析 | 第22-23页 |
| 2．2．3．1 离子交换层析样品的制备及蛋白含量的测定 | 第22页 |
| 2．2．3．2 离子交换层析 | 第22-23页 |
| 2．2．4 超滤 | 第23页 |
| 2．2．5 凝胶过滤层析 | 第23页 |
| 2．2．6 SDS-PAGE电泳与转膜 | 第23-24页 |
| 2．2．6．1 SDS-PAGE电泳 | 第23-24页 |
| 2．2．6．2 转膜 | 第24页 |
| 2．3 活性测定 | 第24-25页 |
| 2．3．1 蛋白酶酶活力测定 | 第24-25页 |
| 2．3．2 酶的生物学测定 | 第25页 |
| 2．4 酶的性质 | 第25-27页 |
| 2．4．1 酶的活力测定 | 第26页 |
| 2．4．2 酶的温度曲线 | 第26页 |
| 2．4．3 酶的温度稳定性曲线 | 第26页 |
| 2．4．4 酶的pH曲线 | 第26页 |
| 2．4．5 pH稳定性曲线 | 第26-27页 |
| 2．4．6 酶的底物专一性 | 第27页 |
| 2．4．7 抑制剂对酶活的影响 | 第27页 |
| 2．5 酶的N-端测序及序列分析 | 第27页 |
| 2．6 被毛孢OWVT-1总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2．7 3’RACE | 第28-29页 |
| 2．7．1 引物设计 | 第28页 |
| 2．7．2 cDNA第一链合成 | 第28-29页 |
| 2．7．3 目的cDNA的扩增 | 第29页 |
| 2．8 蛋白酶cDNA的克隆 | 第29-31页 |
| 2．8．1 PCR产物的回收 | 第29页 |
| 2．8．2 连接反应 | 第29-30页 |
| 2．8．3 感受态E． coli JM109的制备和转化 | 第30页 |
| 2．8．4 重组体的挑选 | 第30-31页 |
| 2．9 质粒DNA的提取 | 第31页 |
| 2．10 DNA序列测定 | 第31-34页 |
| 2．10．1 测序反应体系及产物纯化 | 第31-33页 |
| 2．10．2 序列测定 | 第33-34页 |
| 2．11 DNA序列分析 | 第34-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-51页 |
| 3．1 产酶曲线 | 第35页 |
| 3．2 酶的纯化 | 第35-38页 |
| 3．2．1 离子交换层析样品的制备 | 第35-36页 |
| 3．2．2 离子交换层析 | 第36-37页 |
| 3．2．3 凝胶过滤层析 | 第37-38页 |
| 3．3 酶的性质 | 第38-41页 |
| 3．3．1 酶的活力测定 | 第39页 |
| 3．3．2 温度对酶活的影响 | 第39页 |
| 3．3．3 pH对酶活的影响 | 第39-40页 |
| 3．3．4 酶的底物专一性 | 第40-41页 |
| 3．3．5 抑制剂对酶活的影响 | 第41页 |
| 3．4 酶的生物学测定 | 第41-42页 |
| 3．5 N-端测序及序列分析 | 第42页 |
| 3．6 阳性克隆的分离与纯化 | 第42-44页 |
| 3．7 核苷酸序列测定与分析 | 第44-46页 |
| 3．8 虫生真菌丝氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性比较 | 第46-51页 |
| 第四部分 讨论 | 第51-54页 |
| 第五部分 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
