英文摘要 | 第1-6页 |
中文摘要 | 第6-8页 |
前言 | 第8页 |
材料与方法 | 第8-14页 |
1 主要材料及试剂 | 第9页 |
2 基因捕获 | 第9-11页 |
2.1 细菌文库质粒提取及探针设计 | 第9页 |
2.2 探针标记产物的凝胶分析 | 第9页 |
2.3 单链 DNA的产生 | 第9-10页 |
2.4 cDNA捕获杂交 | 第10-11页 |
2.5 单链cDNA的修复 | 第11页 |
2.6 质粒转染及原位杂交 | 第11页 |
3 RACE(Rapid Amplification of cDNA End) | 第11-14页 |
3.1 引物设计 | 第11-12页 |
3.2 Marathon ready cDNA的决速扩增 | 第12-13页 |
3.3 扩增产物的回收与初步鉴定 | 第13页 |
3.4 RACE产物克隆与序列检测 | 第13-14页 |
4 Northern杂交 | 第14页 |
5 RT-PCR | 第14页 |
实验结果 | 第14-24页 |
1 探针的生物素标记 | 第14-15页 |
2 cDNA单链环形成 | 第15页 |
3 基因捕获技术对目的克隆的富集作用 | 第15-16页 |
4 Marathon RACE产物及初步鉴定 | 第16-17页 |
5 序列检测及开放阅读框架(Open Read Frame,ORF)分析 | 第17-20页 |
5.1 HRNT-1(人 ZA73)序列 | 第17-19页 |
5.2 开放阅读框架氨基酸序列 | 第19-20页 |
6 GenBank Nr Blast同源性检索 | 第20-22页 |
7 人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化株中的表达 | 第22-23页 |
8 在正常组织及肿瘤细胞中的表达 | 第23-24页 |
讨论 | 第24-30页 |
1 HRNT-1(人 ZA73)基因的识别策略 | 第24-27页 |
1.1 疾病侯选基因的获得 | 第24页 |
1.2 电子计算机辅助克隆 | 第24-25页 |
1.3 基因捕获及快速cDNA末端扩增 | 第25-27页 |
2 HRNT-1(人 ZA73)基因的初步识别 | 第27-28页 |
2.1 HRNT-1(人 ZA73)与人支气管上皮细胞的恶性转化相关 | 第27-28页 |
2.2 HRNT-1(人 ZA73)的组织特异性 | 第28页 |
2.3 HRNT-1(人 ZA73)基因与 O-连接 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(O-linked N-acetylgtucosamine,OGT)的关系 | 第28页 |
2.4 HRNT-1(人 ZA73)基因功能的推测 | 第28页 |
3 下一步拟开展的工作 | 第28-30页 |
3.1 HRNT-1(人 ZA73)表达的组织特异性及时相特异性研究 | 第29页 |
3.2 研究 HRNT-1(人 ZA73)基因的多态性 | 第29页 |
3.3 HRNT-1(人 ZA73)在人体肺癌发生、发展中的作用机制 | 第29-30页 |
参考文献 | 第30-31页 |
附录 HRNT-1(人 ZA73)部分测序结果 | 第31-34页 |
文献综述 蛋白质糖基化与疾病 | 第34-46页 |
1 前言 | 第34页 |
2 蛋白质糖基化 | 第34-36页 |
2.1 N-聚糖链合成及糖基化 | 第35页 |
2.2 O-聚糖链合成及糖基化 | 第35-36页 |
3 蛋白质糖基化转移酶 | 第36-42页 |
3.1 N-聚糖糖基转移酶 | 第37-40页 |
3.2 O-聚糖糖基转移酶 | 第40-42页 |
4 结束语 | 第42-43页 |
5 参考文献 | 第43-46页 |