| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-15页 |
| ·咔唑的性质 | 第8-9页 |
| ·咔唑降解菌株 | 第9页 |
| ·咔唑的降解途径 | 第9-10页 |
| ·降解咔唑的酶及其性质的研究进展 | 第10-12页 |
| ·1，9a-双加氧酶（CARDO） | 第10-11页 |
| ·2’-氨基联苯-2，3-二羟基1，2-双加氧酶（HOADA） | 第11-12页 |
| ·间位裂解化合物水解酶 | 第12页 |
| ·咔唑降解基因簇的定位和分布的研究 | 第12-15页 |
| 材料和方法 | 第15-26页 |
| ·实验仪器 | 第15页 |
| ·实验试剂和酶制剂 | 第15页 |
| ·carAa,carAc,carB,carC 及car 基因簇重组质粒构建 | 第15-20页 |
| ·菌株、引物信息既反应体系 | 第15-17页 |
| ·细菌基因组DNA 的提取 | 第17页 |
| ·基因片段的回收 | 第17-18页 |
| ·DNA 回收片段与pET-28a(+)载体的连接 | 第18页 |
| ·BL21 超级感受态的制备 | 第18-19页 |
| ·连接体系的转化 | 第19页 |
| ·质粒提取 | 第19-20页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第20页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第20页 |
| ·基因在PJ061 基因组DNA 上的定位 | 第20-21页 |
| ·EcoRI 和BamHI 酶切基因组DNA | 第20-21页 |
| ·BL（pETWB）中表达的酶的生物活性检测 | 第21页 |
| ·目的蛋白的表达和纯化 | 第21-22页 |
| ·CarAa,CarAc,CarB,CarC 蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第21页 |
| ·CarB 和CarC 蛋白的纯化 | 第21-22页 |
| ·CarC 融合蛋白抗体的制备及抗体效价的检测 | 第22-24页 |
| ·动物材料 | 第22页 |
| ·CarC 融合蛋白免疫BALB/c 小鼠 | 第22页 |
| ·小鼠CarC 多抗的收集和保存 | 第22页 |
| ·CarC 融合蛋白抗体的ELISA 检测 | 第22-24页 |
| ·CarC 蛋白的Western-blot 检测 | 第24-26页 |
| ·菌体的处理和SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第24页 |
| ·蛋白的转膜和杂交 | 第24-26页 |
| 结果 | 第26-35页 |
| ·细菌的筛选和鉴定 | 第26页 |
| ·降解咔唑的上游基因的克隆和鉴定 | 第26-28页 |
| ·car 基因簇的克隆及鉴定 | 第26-27页 |
| ·car 基因簇在JS061 基因组上的定位 | 第27-28页 |
| ·car 基因簇中各基因表达载体的构建与表达 | 第28-32页 |
| ·carAa 基因表达载体的构建、鉴定和表达 | 第28-29页 |
| ·carAc 基因表达载体的构建和鉴定 | 第29页 |
| ·carB 基因表达载体的构建和鉴定 | 第29-30页 |
| ·CarB 蛋白的表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·CarC 蛋白的表达载体的构建和鉴定 | 第31页 |
| ·CarC 蛋白的表达和纯化 | 第31-32页 |
| ·CarC 多克隆抗体的制备及效价检测 | 第32页 |
| ·CarB 蛋白生物活性的检测 | 第32-33页 |
| ·咔唑诱导下JS061 中CarC 蛋白表达水平的检测 | 第33-35页 |
| 讨论 | 第35-37页 |
| ·car 基因簇的分离和carC 基因的定位 | 第35页 |
| ·carAa，carAc，carB 和carC 基因的表达 | 第35页 |
| ·JS061 中CarC 蛋白的诱导表达 | 第35-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
