| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-29页 |
| ·丹参研究概述 | 第11-21页 |
| ·丹参的主要化学成分 | 第11-15页 |
| ·药理作用 | 第15-18页 |
| ·丹参资源应用和利用现状 | 第18-19页 |
| ·丹参生物技术研究现状 | 第19-21页 |
| ·EST技术在新基因发掘和功能研究方面的应用 | 第21-25页 |
| ·EST技术的原理和方法 | 第21页 |
| ·EST技术的应用和发展 | 第21-22页 |
| ·EST技术在发现新基因方面的应用 | 第22-25页 |
| ·植物富含谷氨酸蛋白研究进展 | 第25-27页 |
| ·本研究的目的意义 | 第27-29页 |
| 第2章 丹参SmGRP1基因的克隆及其表达特征研究 | 第29-51页 |
| ·实验材料与试剂 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·试剂与药品 | 第29-31页 |
| ·仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-39页 |
| ·丹参SmGRP1基因的电子克隆 | 第31-32页 |
| ·丹参总DNA的提取 | 第32页 |
| ·丹参总RNA的提取及cDNA的合成 | 第32-33页 |
| ·丹参SmGRP1全长基因的获得 | 第33-35页 |
| ·丹参SmGRP1基因启动子区的克隆 | 第35-38页 |
| ·丹参SmGRP1基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| ·丹参SmGRP1基因的器官特异性和诱导表达 | 第38-39页 |
| ·实验结果与分析 | 第39-51页 |
| ·丹参SmGRP1基因及其启动子区的克隆以及序列特性分析 | 第39-44页 |
| ·丹参SmGRP1基因编码产物的特性分析 | 第44-47页 |
| ·SmGRP1基因在不同器官和诱导条件下的表达 | 第47-49页 |
| ·SmGRP1类似基因在其它植物中的发现 | 第49-51页 |
| 第3章 SmGRP1蛋白的体外表达及其Ca~(2+)结合特性研究 | 第51-65页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·扩增模板 | 第51页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·试剂与药品 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51-52页 |
| ·实验方法 | 第52-60页 |
| ·丹参SmGRP1基因原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第53-55页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第55-57页 |
| ·纯化蛋白的透析 | 第57页 |
| ·重组蛋白的Western杂交分析 | 第57-59页 |
| ·重组蛋白Ca~(2+)结合特性分析 | 第59-60页 |
| ·实验结果与分析 | 第60-65页 |
| ·SmGRP1原核表达载体的构建及其向宿主菌的转化 | 第60-61页 |
| ·SmGRP1蛋白的体外表达与纯化 | 第61-63页 |
| ·SmGRP1蛋白钙离子结合特性研究 | 第63-65页 |
| 第4章 丹参SmGRP1基因的表达调控模式研究 | 第65-83页 |
| ·实验材料与方法 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·菌种和载体 | 第65页 |
| ·生化试剂 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-71页 |
| ·表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·重组质粒向农杆菌的转化 | 第67-68页 |
| ·丹参以潮霉素为筛选标记的选择压的确定 | 第68页 |
| ·重组质粒对丹参的遗传转化 | 第68-69页 |
| ·转化体的检测 | 第69页 |
| ·GUS组织化学检测 | 第69-70页 |
| ·不同处理下转基因材料的GUS活性检测 | 第70-71页 |
| ·实验结果与分析 | 第71-83页 |
| ·丹参SmGRP1基因Promoter-deletion载体的构建及其农杆菌的转化 | 第71-73页 |
| ·丹参外植体潮霉素选择压的确定 | 第73-74页 |
| ·重组质粒对丹参的转化及转化体的获得 | 第74-76页 |
| ·丹参SmGRP1基因表达调控特性分析 | 第76-83页 |
| 第5章 丹参SmGRP1基因在植物气孔运动中的作用研究 | 第83-101页 |
| ·实验材料 | 第83页 |
| ·实验材料 | 第83页 |
| ·菌株与质粒 | 第83页 |
| ·试剂与药品 | 第83页 |
| ·仪器 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-90页 |
| ·SmGRP1基因RNA interference(RNAi)重组质粒的构建 | 第83-85页 |
| ·SmGRP1基因过表达重组质粒的构建 | 第85-86页 |
| ·重组质粒导入农杆菌EHA105 | 第86页 |
| ·携带重组质粒的根癌农杆菌对丹参的转化 | 第86-87页 |
| ·转化体的检测 | 第87-89页 |
| ·表皮条的剥离及分析 | 第89页 |
| ·转化体脱水率的测定 | 第89-90页 |
| ·实验结果与分析 | 第90-101页 |
| ·丹参SmGRP1基因RNAi载体的构建及其向农杆菌的转化 | 第90页 |
| ·丹参SmGRP1基因过表达载体的构建及其向农杆菌的转化 | 第90-94页 |
| ·重组质粒对丹参的转化及转化体的获得 | 第94-96页 |
| ·丹参SmGRP1基因在植物气孔运动中的作用研究 | 第96-100页 |
| ·SmGRP1基因影响植物的蒸腾速率 | 第100-101页 |
| 第6章 讨论 | 第101-110页 |
| ·SmGRP1是一个新的富含谷氨酸蛋白基因 | 第101-102页 |
| ·SmGRP1蛋白是一个可能的Ca~(2+)结合蛋白 | 第102-104页 |
| ·SmPromoter是一个逆境胁迫诱导型的启动子 | 第104-106页 |
| ·SmGRP1基因参与了ABA和黑暗诱导的气孔关闭 | 第106-108页 |
| ·本研究需进一步完善的工作 | 第108-110页 |
| 结论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第126页 |
