| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| ·衣壳蛋白靶向灭活策略 | 第12-14页 |
| ·猪2 型圆环病毒 | 第14-18页 |
| ·PCV2 流行病学 | 第14页 |
| ·PCV2 病原特征 | 第14页 |
| ·PCV2 感染临床症状 | 第14-15页 |
| ·PCV2 感染病理变化 | 第15页 |
| ·常用PCV2 实验室诊断方法 | 第15-17页 |
| ·PCV2 致病机理 | 第17-18页 |
| ·CTVI 策略应用于PCV2 的理论基础 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的、意义及主要内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-40页 |
| ·材料 | 第20-26页 |
| ·病毒、质粒、菌株及细胞系 | 第20页 |
| ·药品和酶 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·PCR 引物合成 | 第22-23页 |
| ·分析工具软件 | 第23页 |
| ·试剂的配制 | 第23-26页 |
| ·实验方法 | 第26-40页 |
| ·猪2 型圆环病毒Cap 基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·金黄色葡萄球菌核酸酶SN 基因的扩增 | 第27页 |
| ·PCR 产物的回收与克隆 | 第27-28页 |
| ·重组克隆质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·序列测定与分析 | 第29页 |
| ·猪2 型圆环病毒Cap 基因与金黄色葡萄球菌核酸酶SN 基因融合基因构建 | 第29-30页 |
| ·表达JNPC、PNJC、Cap 原核重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| ·表达JNPC、PNJC、Cap 真核重组质粒的构建 | 第31页 |
| ·基因工程重组表达菌的诱导表达与鉴定 | 第31-32页 |
| ·靶向核酸酶生物学活性分析 | 第32页 |
| ·PK15 细胞培养与转染 | 第32-33页 |
| ·转基因细胞基因组DNA 的制备 | 第33页 |
| ·PCR 鉴定转基因细胞 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR 检测转录产物的mRNA | 第34-35页 |
| ·Northern Blot | 第35-37页 |
| ·Western Blot 分析 | 第37页 |
| ·靶向核酸酶生物学活性鉴定 | 第37页 |
| ·PCV2 病毒感染 | 第37页 |
| ·半定量PCR 检测转基因细胞系中PCV2 含量 | 第37-38页 |
| ·荧光定量PCR 检测转基因细胞系中PCV2 含量 | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-70页 |
| ·猪2 型圆环病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达载体的构建 | 第40-46页 |
| ·猪2 型圆环病毒衣壳蛋白Cap 基因的扩增、克隆及鉴定 | 第40页 |
| ·金黄色葡萄菌核酸酶SN 基因的扩增、克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| ·猪2 型圆环病毒衣壳蛋白靶向核酸酶重组基因克隆载体的构建 | 第41-44页 |
| ·重组原核表达载体的构建及鉴定 | 第44页 |
| ·重组真核表达载体的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌ROSETTA(DE3)中的表达与鉴定 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白核酸酶活性分析 | 第47-49页 |
| ·PK15 稳定转基因细胞系的建立及检测 | 第49-52页 |
| ·稳定转基因细胞系建立 | 第49页 |
| ·转基因细胞系PCR 鉴定 | 第49-50页 |
| ·RT-PCR 检测转录产物的mRNA | 第50-52页 |
| ·Northern Blot | 第52页 |
| ·融合蛋白WESTERN BLOT 分析 | 第52-53页 |
| ·靶向核酸酶生物学活性鉴定 | 第53-54页 |
| ·半定量PCR 法检测各转基因结构抗病毒效果 | 第54-64页 |
| ·半定量PCR 条件的建立 | 第54-55页 |
| ·各样品病毒滴度半定量PCR 分析 | 第55-56页 |
| ·电泳结果 | 第56-59页 |
| ·最佳条件摸索中第十代对照样品PCR 产物电泳Volume 值 | 第59-60页 |
| ·各代次半定量PCR 结果 | 第60-63页 |
| ·数据分析结果 | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR 法检测各转基因结构抗病毒效果 | 第64-70页 |
| ·标准曲线的制作 | 第64-65页 |
| ·熔解曲线分析 | 第65-66页 |
| ·PCV2 基因的荧光定量PCR 结果 | 第66-69页 |
| ·定量分析结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-81页 |
| ·CTVI 策略应用于猪2 型圆环病毒的理论依据 | 第70-71页 |
| ·猪2 型圆环病毒衣壳蛋白靶向核酸酶融合基因的原核表达 | 第71-73页 |
| ·猪2 型圆环病毒衣壳蛋白靶向核酸酶融合基因转基因细胞系的建立 | 第73-76页 |
| ·阳离子脂质体细胞转染 | 第73-74页 |
| ·稳定表达转基因细胞系的筛选 | 第74-76页 |
| ·抗猪2 型圆环病毒感染试验 | 第76-79页 |
| ·半定量PCR 方法分析抗病毒效果 | 第76-77页 |
| ·实时荧光定量PCR 方法分析抗病毒效果 | 第77-79页 |
| ·转基因抗病育种 | 第79-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 在读期间发表的论文 | 第89-90页 |
| 作者简历 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
