| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 前言 | 第11-25页 |
| 1、SHIP的结构 | 第11-13页 |
| ·氨基端SH2结构域 | 第11-12页 |
| ·磷脂酰肌醇-5-磷酸酯酶催化结构域 | 第12-13页 |
| ·羧基端富含脯氨基酸结构域 | 第13页 |
| 2 分布 | 第13页 |
| 3 与SHIP相关的肌醇-5-磷酸酯酶家族其他成员 | 第13-15页 |
| ·sSHIP | 第13-14页 |
| ·SHIP2 | 第14-15页 |
| 4 SHIP调控的信号转导通 | 第15-18页 |
| ·负调控PI3K/Akt信号通路 | 第15-17页 |
| ·SHIP介导Ins(1,3,4,5)P4水解:影响Ca~(2+)内流及含PH结构域蛋白 | 第17-18页 |
| ·SHIP抑制Ras信号通路:SHIP与Grb2相互竞争与磷酸化的Shc结合 | 第18页 |
| 5 SHIP的抑癌作用及其异常改变与肿瘤发展 | 第18-21页 |
| ·SHIP对造血细胞生长、增殖的影响 | 第18-19页 |
| ·SHIP诱导细胞凋亡 | 第19-20页 |
| ·SHIP对细胞迁移、浸润的影响 | 第20页 |
| ·SHIP基因突变及表达水平与急性白血病 | 第20-21页 |
| 6 其它 | 第21-22页 |
| ·血小板 | 第21页 |
| ·炎症反应 | 第21-22页 |
| 7 本研究的目的和内容 | 第22-25页 |
| 第一部分:pcDNA3.1-GFP-hSHIP重组质粒的构建及稳定 #转染HeLa细胞株的建立 | 第25-56页 |
| ·材料 | 第25-33页 |
| ·方法 | 第33-41页 |
| ·外周血单个核细胞分离 | 第33页 |
| ·RNA提取 | 第33-34页 |
| ·总mRNA逆转录 | 第34页 |
| ·递减PCR扩增hSHIP基因 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的构建及其转化 | 第35-37页 |
| ·重组子的筛选和序列分析 | 第37-38页 |
| ·稳定转染细胞系的建立 | 第38-40页 |
| ·稳定转染细胞系的鉴定 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-52页 |
| ·总RNA质量鉴定结果 | 第41页 |
| ·hSHIP基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-GFP-hSHIP的筛选和序列分析 | 第42-49页 |
| ·HeLa野生型hSHIP及空载稳定表达株的建立: | 第49-52页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·pcDNA3.1-GFP-hSHIP构建 | 第52-53页 |
| ·稳定转染及鉴定 | 第53-56页 |
| 第二部分:hSHIP对HeLa细胞增殖、凋亡的影响及机理初探 | 第56-75页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞周期及细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·hSHIP体外及体内对HeLa细胞生长、存活的影响 | 第58页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞Akt表达量及磷酸化水平的影响 | 第58-60页 |
| ·统计学方法 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-68页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞株细胞周期的影响 | 第60-62页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞株凋亡的影响 | 第62-64页 |
| ·体外及体内实验检测hSHIP对HeLa细胞生长、存活的影响 | 第64-66页 |
| ·Akt1/2 mRNA、总Akt蛋白表达及Akt蛋白磷酸化水平检测 | 第66-68页 |
| ·讨论 | 第68-75页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞Akt表达水平的影响 | 第68-69页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞株细胞周期的影响 | 第69-70页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞凋亡的影响 | 第70-72页 |
| ·hSHIP对HeLa细胞存活及生长的影响。 | 第72-75页 |
| 总结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
