| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-30页 |
| ·1,3-丙二醇概述 | 第12-15页 |
| ·1,3-丙二醇的基本性质 | 第12页 |
| ·1,3-丙二醇的主要用途 | 第12-14页 |
| ·1,3-丙二醇的生产概况 | 第14-15页 |
| ·生物法合成1,3-丙二醇的研究进展 | 第15-19页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的菌种和生产能力 | 第15-16页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的代谢途径 | 第16-18页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇的基因工程生产情况 | 第18-19页 |
| ·1,3-PD 生物合成途径中的关键酶 | 第19-25页 |
| ·甘油脱水酶的研究进展 | 第20-22页 |
| ·甘油脱水酶的催化机理 | 第22页 |
| ·甘油脱水酶的失活研究情况 | 第22-23页 |
| ·甘油脱水酶的克隆表达研究情况 | 第23页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶的研究进展 | 第23-25页 |
| ·体外定点突变技术研究进展 | 第25-28页 |
| ·论文的研究意义和技术框架 | 第28-30页 |
| ·论文研究的意义 | 第28-29页 |
| ·论文研究的技术框架 | 第29-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-40页 |
| ·材料 | 第30-33页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·细菌总DNA 的提取 | 第33页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第33页 |
| ·PCR 产物的回收方法 | 第33页 |
| ·PCR 产物与表达载体的连接 | 第33-34页 |
| ·热击用大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第35页 |
| ·蛋白质SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35页 |
| ·定点突变方法 | 第35-37页 |
| ·分析方法 | 第37-40页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第37页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第37页 |
| ·丙醛浓度的测定 | 第37-38页 |
| ·甘油脱水酶活性的测定 | 第38-40页 |
| 第3章 K. pneumoniae XJPD-Li 甘油脱水酶的克隆与表达 | 第40-48页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·甘油脱水酶基因的克隆与鉴定 | 第40-44页 |
| ·甘油脱水酶基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·甘油脱水酶表达质粒pET-28a(+)-dhaBCE 的构建 | 第42-44页 |
| ·甘油脱水酶基因的序列分析 | 第44页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-dhaBCE 在E.coli BL21（DE3）中诱导表达 | 第44-45页 |
| ·重组甘油脱水酶dhaBCE 最适pH 值的测定 | 第45-46页 |
| ·重组甘油脱水酶dhaBCE 最适温度的测定 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第4章 K. pneumoniae XJPD-Li 甘油脱水酶α亚基的突变研究 | 第48-60页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·突变设计的引物与策略 | 第48-50页 |
| ·甘油脱水酶突变体M193α的构建与验证 | 第50-54页 |
| ·甘油脱水酶突变体M407 α的构建与验证 | 第54-56页 |
| ·突变体M193α、M407α在E.coli BL21（DE3）中诱导表达 | 第56页 |
| ·突变体M193α、M407α甘油脱水酶最适pH 值的测定 | 第56-57页 |
| ·突变体M193α、M407α甘油脱水酶最适温度测定 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第5章 K. pneumoniae XJPD-Li 甘油脱水酶β亚基的突变研究 | 第60-68页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·突变设计的引物与策略 | 第60-61页 |
| ·甘油脱水酶突变体M47β的构建与验证 | 第61-63页 |
| ·甘油脱水酶突变体M189β的构建与验证 | 第63-65页 |
| ·突变体M47β、M189β在E.coli BL21（DE3）中诱导表达 | 第65页 |
| ·突变体M47β、M189β甘油脱水酶最适pH 值的测定 | 第65-66页 |
| ·突变体M47β、M189β甘油脱水酶最适温度测定 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-68页 |
| 第6章 dhaBCE 基因与yqhD 基因串联表达载体的构建 | 第68-74页 |
| ·引言 | 第68页 |
| ·yqhD 基因的克隆及鉴定 | 第68-71页 |
| ·yqhD 基因扩增引物 | 第69页 |
| ·yqhD 基因扩增 | 第69-70页 |
| ·yqhD 基因的克隆及鉴定 | 第70-71页 |
| ·重组质粒pET-dhaBCE-yqhD 的构建 | 第71-73页 |
| ·重组质粒pET-dhaBCE-yqhD 载体的构建 | 第72页 |
| ·重组质粒pET-dhaBCE-yqhD 基因的诱导表达 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第7章 结论与展望 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录A 硅胶膜质粒DNA 小量提取 | 第82-83页 |
| 附录B 多功能DNA 纯化回收试剂盒 | 第83-84页 |
| 附录C 质粒快速鉴定法筛选重组菌株 | 第84-85页 |
| 附录C yqhD 测序结果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简介 | 第87-88页 |
| 附表 | 第88页 |
