丰产梨α-法尼烯合成酶基因RNAi和反义表达载体的构建及遗传转化研究
| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-23页 |
| ·虎皮病与α-法尼烯 | 第13-14页 |
| ·导致虎皮病的生理生化因素 | 第14-16页 |
| ·虎皮病的防治 | 第14-16页 |
| ·RNA 干扰 | 第16-21页 |
| ·RNAi 的产生和发展 | 第17页 |
| ·RNAi 与其他基因表达抑制技术的比较 | 第17-18页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNAi 表达载体的构建设计原则 | 第19-20页 |
| ·RNAi 技术的应用 | 第20-21页 |
| ·基因功能分析 | 第20-21页 |
| ·植物抗病的研究 | 第21页 |
| ·新药物的研究和开发 | 第21页 |
| ·反义RNA 技术的原理及作用机制 | 第21-23页 |
| ·反义RNA 技术在植物上的应用 | 第22-23页 |
| 2 梨组织培养及遗传转化研究进展 | 第23-31页 |
| ·影响梨叶片高效再生的因素 | 第24-28页 |
| ·基因型 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·培养基和植物生长调节剂 | 第24-25页 |
| ·卡那霉素对叶片再生的影响 | 第25-26页 |
| ·头孢霉素(Cef)对叶片再生的影响 | 第26页 |
| ·AgNO_3 对叶片再生的影响 | 第26-27页 |
| ·AS 对转化效率的影响 | 第27页 |
| ·叶片放置方式 | 第27-28页 |
| ·培养环境对器官形态建成的影响 | 第28页 |
| ·梨的遗传转化 | 第28-31页 |
| ·影响转基因频率的因素 | 第29-31页 |
| ·基因型 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29-30页 |
| ·标记基因 | 第30页 |
| ·抗菌肽的活性及其稳定性 | 第30页 |
| ·Vir 区基因活化对转化的影响 | 第30-31页 |
| ·检测方法 | 第31页 |
| ·GUS 活性检测 | 第31页 |
| ·PCR 检测 | 第31页 |
| ·Southern 杂交检测 | 第31页 |
| 3 材料与方法 | 第31-49页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·植物材料 | 第31-32页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·PCR 引物 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·RNA 的提取方法 | 第33-34页 |
| ·CTAB 法提取梨果皮总RNA | 第33页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第33-34页 |
| ·检测RNA 纯度 | 第34-35页 |
| ·配制药品 | 第34-35页 |
| ·RNA 电泳 | 第35-36页 |
| ·药品配制 | 第35页 |
| ·凝胶的制备 | 第35-36页 |
| ·RNA 反转录 | 第36页 |
| ·PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·连接反应 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第38-39页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA 及酶切鉴定 | 第39页 |
| ·酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·用玻璃奶方法回收纯化DNA 片段 | 第40-41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·碱法大量提取质粒DNA | 第41-42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| ·RNAi 表达载体PBI-L-S 的构建 | 第42-47页 |
| ·PCR 引物设计 | 第42-43页 |
| ·PCR 扩增 | 第43页 |
| ·发夹结构的构建 | 第43-47页 |
| ·反义表达载体PBI-L 的构建 | 第47-48页 |
| ·根癌农杆菌EHA105 感受态细胞的制备及转化 | 第48页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第48页 |
| ·抗生素对叶片再生的影响 | 第48-49页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第48-49页 |
| ·抑菌抗生素对丰产梨离体叶片再生的影响 | 第49页 |
| ·抑菌抗生素浓度的确定 | 第49页 |
| ·AgNO_3 浓度的确定 | 第49页 |
| 4 结果与分析 | 第49-59页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·RNAi 表达载体PBI-L-S 的构建 | 第49-50页 |
| ·正、反片段的扩增及酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·反义表达载体PBI-L 的构建 | 第50-52页 |
| ·遗传转化 | 第52-56页 |
| ·卡那霉素对叶片再生的影响 | 第52-53页 |
| ·卡那霉素对组培苗新梢增殖的影响 | 第53页 |
| ·头孢霉素(Cef)对叶片再生的影响 | 第53-54页 |
| ·羧苄青霉素(Carb)对叶片再生的影响 | 第54-55页 |
| ·AgNO_3 对叶片再生的影响 | 第55-56页 |
| ·AS 对转化效率的影响 | 第56页 |
| ·转基因植株苗的检测 | 第56-59页 |
| 5 讨论 | 第59-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
