| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·胎儿弯杆菌概述 | 第10-11页 |
| ·胎儿弯杆菌病诊断方法的国内外研究现状 | 第11-14页 |
| ·单克隆抗体制备的研究背景 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 2 实验一胎儿弯杆菌表面蛋白基因 SAPA 的克隆表达 | 第16-28页 |
| ·材料和方法 | 第16-23页 |
| ·菌种、载体、宿主菌及胎儿弯杆菌病的阳性血清 | 第16页 |
| ·主要商品试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第17-19页 |
| ·胎儿弯杆菌基因组 DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·引物的设计 | 第20页 |
| ·目的基因的扩增 | 第20页 |
| ·大肠埃希氏菌感受态细胞的制备及转化 | 第20页 |
| ·PCR 产物连接 PMD 18 T-VECTOR 及重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒 PET32-SAPA-N 和 PET32-SAPA-C 的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·表达蛋白的小量纯化 | 第22页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第22-23页 |
| ·纯化蛋白的 WESTERN BLOT 分析 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-27页 |
| ·PCR 扩增目的基因的鉴定结果 | 第23-24页 |
| ·重组质粒 T-SAPA-N 和 T-SAPA-C 的酶切鉴定结果 | 第24-25页 |
| ·重组质粒 PET32-SAPA-N 和 PET32-SAPA-C 的鉴定结果 | 第25页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及其纯化结果 | 第25-26页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定结果 | 第26-27页 |
| ·纯化蛋白的 WESTERN BLOT 分析结果 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| 3 试验二间接 ELISA 检测方法的建立 | 第28-40页 |
| ·材料和方法 | 第28-33页 |
| ·主要商品器材 | 第28页 |
| ·血清样品 | 第28-29页 |
| ·包被用的抗原液 | 第29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| ·间接 ELISA 最佳工作条件的确定 | 第30-31页 |
| ·最终确定的间接 ELISA 的操作程序 | 第31页 |
| ·判定标准的建立 | 第31-32页 |
| ·特异性试验 | 第32页 |
| ·敏感性试验 | 第32页 |
| ·重复性试验 | 第32页 |
| ·临床样品的检测 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-39页 |
| ·间接 ELISA 最佳的工作条件 | 第33-35页 |
| ·判定标准的建立 | 第35-36页 |
| ·特异性试验 | 第36页 |
| ·敏感性试验 | 第36-37页 |
| ·重复性试验 | 第37-38页 |
| ·临床样品的检测 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 4 试验三胎儿弯杆菌表面蛋白抗原单克隆抗体的制备 | 第40-52页 |
| ·材料 | 第40-43页 |
| ·试验动物及试验细胞 | 第40-41页 |
| ·主要商品试剂 | 第41页 |
| ·自配的溶液 | 第41-43页 |
| ·方法 | 第43-48页 |
| ·小鼠的免疫 | 第44页 |
| ·小鼠腹腔巨噬细胞收集 | 第44页 |
| ·SP2/O 骨髓瘤细胞的复苏、传代与冻存 | 第44-45页 |
| ·免疫小鼠脾细胞与 SP2/O 骨髓瘤细胞的融合 | 第45-46页 |
| ·间接 ELISA 法筛选阳性杂交瘤 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体的大量制备及腹水效价测定 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞的冷冻保存 | 第48页 |
| ·单克隆抗体亚型及特异性鉴定 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性的分析 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·免疫小鼠抗体检测结果 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得及腹水效价测定结果 | 第49页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定及特异性鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性的分析 | 第50页 |
| ·腹水纯化结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
