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芍药苷对小鼠日本血吸虫病肝纤维化IL-13信号转导通路的影响

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-19页
1 前言第19-24页
2 材料与方法第24-47页
   ·实验动物第24页
   ·含尾蚴的阳性钉螺第24-25页
   ·引物设计与合成第25页
   ·药物及试剂第25-27页
   ·部分主要试剂的配制第27-29页
   ·仪器与设备第29-30页
   ·尾蚴诱导的日本血吸虫病肝纤维化小鼠模型的制备第30页
   ·动物分组、给药方案与标本采集处理第30页
   ·肝组织匀浆羟脯氨酸(Hyp)含量测定第30-32页
     ·试剂配制第30-31页
     ·标准曲线的绘制第31页
     ·胃酶酸解法肝组织羟脯氨酸的测定第31-32页
     ·结果计算的判断第32页
   ·肝组织匀浆胶原I(ColI)含量测定第32-33页
   ·肝组织匀浆胶原III(ColIII)含量测定第33页
   ·肝组织匀浆IL-13含量测定第33-34页
   ·肝组织匀浆 IL-13Rα2 含量测定第34-35页
   ·肝脏组织病理学观察及评分标准第35-38页
     ·病理切片的制作第35-36页
       ·HE染色步骤第35-36页
       ·Masson染色步骤第36页
     ·病理组织学观察及分级标准第36页
     ·小鼠肝脏 α-SMA 免疫组化染色定量分析第36-37页
     ·小鼠肝脏ColI免疫组化染色定量分析第37-38页
   ·小鼠HSCs的分离、培养第38-39页
   ·原代HSC增值实验的检测方法第39页
   ·PAE对IL-13刺激小鼠HSCs分泌ColI的影响第39-40页
     ·细胞分组第39页
     ·ELISA检测HSCs上清中ColI浓度第39-40页
   ·RT-PCR 法检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 胞核内 IL-4Rα、IL-13Rα1、IL-13Rα2 基因表达的影响第40-42页
     ·总RNA的提取第40-42页
       ·去RNase处理第40页
       ·HSC总RNA提取第40-41页
       ·HSC总RNA纯度及浓度测定第41页
       ·HSC总RNA完整性检测第41页
       ·cDNA第一链的合成第41-42页
       ·PCR扩增第42页
       ·电泳鉴定及凝胶图像分析第42页
   ·RT-PCR 法检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 胞核内 Col Iα1、Col Iα2 基因表达的影响第42页
   ·RT-PCR 法检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 胞核内 SOCS-1 基因表达的影响第42-43页
   ·蛋白免疫印迹(Western blotting)检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 胞浆内 Col I蛋白表达的影响第43-46页
     ·HSC细胞层蛋白的提取第43页
     ·蛋白定量第43-44页
     ·Western blotting 操作步骤第44-46页
       ·制备聚丙烯酰胺凝胶并蛋白电泳第44-45页
       ·半干式电转移第45页
       ·免疫反应第45页
       ·化学发光、显影、定影第45-46页
       ·照片图像分析第46页
   ·Western blotting检测PAE对rIL-13刺激的HSC胞浆内STAT6、p-STAT6 蛋白表达的影响第46页
   ·蛋白免疫印迹(Western blotting)检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 内 SOCS-1 蛋白表达的影响第46页
   ·统计学处理第46-47页
3 结果第47-62页
   ·PAE 对血吸虫性肝纤维化小鼠肝脏组织病理学的影响第47-50页
     ·HE染色第47页
     ·Masson染色第47页
     ·免疫组织化学染色第47-50页
       ·ColI免疫组织化学染色第47页
       ·α-SMA 免疫组织化学染色第47-50页
   ·PAE对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织匀浆羟脯氨酸的影响第50页
   ·PAE 对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织 Col I 和 Col III 表达的影响第50-51页
   ·PAE对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织匀浆IL-13表达的影响第51-52页
   ·PAE 对血吸虫性肝纤维化小鼠肝组织匀浆 IL-13Rα2 表达的影响第52页
   ·PAE 对 IL-13 刺激的小鼠 HSC 增值的影响第52-53页
   ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 胶原 I 表达的影响第53-56页
     ·ELISA 检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 上清中胶原 I 蛋白含量的影响第53-54页
     ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC 内 Col I 蛋白转录和翻译水平的影响第54-56页
       ·Western blotting 检测 PAE 对 IL-13 刺激的 HSC Col I 蛋白转录水平的影响第54页
       ·RT-PCR检测PAE对IL-13刺激的HSC内ColI蛋白翻译水平的影响第54-56页
   ·PAE 对 IL-13 刺激 HSC 的受体成分的影响第56-57页
   ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC JAK-STAT6 通路的变化及对 SOCS-1 表达的影响第57-62页
     ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC STAT6 磷酸化水平的影响第57-59页
       ·IL-13 刺激的 HSC STAT6 磷酸化水平的变化第57页
       ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC STAT6 磷酸化水平的影响第57-59页
     ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC SOCS-1 表达的影响第59-62页
       ·IL-13 刺激的 HSC SOCS-1 表达水平的变化第59-60页
       ·PAE 对 IL-13 刺激的 HSC SOCS-1 表达水平的影响第60-62页
4 讨论第62-72页
5 结论第72-73页
6 参考文献第73-84页
附录一 个人简历第84-86页
附录二 致谢第86-87页
附录三 综述第87-98页

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