| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第11-13页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白 | 第13-17页 |
| 1.2.1 营养期杀虫蛋白的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 营养期杀虫蛋白Vip3的结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 营养期杀虫蛋白的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.4 Vip3Aa11和Vip3Aa39 | 第16-17页 |
| 1.3 Vip3的应用前景 | 第17-18页 |
| 1.3.1 转vip基因植物 | 第17页 |
| 1.3.2 构建融合蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3.3 构建工程菌 | 第18页 |
| 1.3.4 Vip3A与基因重组 | 第18页 |
| 1.4 Vip3的改造方式 | 第18-20页 |
| 1.4.1 定点突变 | 第19页 |
| 1.4.2 结构域互换 | 第19页 |
| 1.4.3 随机突变 | 第19-20页 |
| 1.5 三种重要的农业害虫 | 第20-21页 |
| 1.5.1 小菜蛾 | 第20页 |
| 1.5.2 甜菜夜蛾 | 第20页 |
| 1.5.3 棉铃虫 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的意义和技术路线 | 第21-22页 |
| 1.6.1 目的意义 | 第21页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.3 供试昆虫 | 第24页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 基因片段置换 | 第25页 |
| 2.2.2 PCR引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 PCR基因扩增体系 | 第26页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| 2.2.5 酶切与连接体系 | 第27页 |
| 2.2.6 E.coil感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.7 热激转化JM109感受态细胞 | 第28页 |
| 2.2.8 菌落PCR验证 | 第28页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第28-29页 |
| 2.2.10 重组质粒序列测定及分析 | 第29页 |
| 2.2.11 热激转化BL21(DE3)感受态细胞 | 第29页 |
| 2.2.12 蛋白在E.coli中诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| 2.2.14 蛋白定量 | 第30页 |
| 2.2.15 生物活性测定与数据分析 | 第30-31页 |
| 2.2.16 胰蛋白酶消化实验 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42页 |
| 3.1 目的基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3.2 表达载体的构建 | 第33-36页 |
| 3.2.1 含vip3Aa11和vip3Aa39基因片段表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3.2.2 序列分析鉴定 | 第34-36页 |
| 3.3 目的基因与置换体基因的表达与分析 | 第36-37页 |
| 3.4 室内杀虫活性测定 | 第37-40页 |
| 3.5 Vip3Aa11和Vip3Aa39及置换体蛋白对胰蛋白酶敏感性分析 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 | 第52页 |
