中文摘要 | 第3-6页 |
Abstract | 第6-9页 |
符号说明 | 第14-16页 |
第一章 文献综述 | 第16-35页 |
1 内源性反转录病毒研究进展 | 第16-24页 |
1.1 内源性反转录病毒概述 | 第16-18页 |
1.2 内源性反转录病毒作用机制 | 第18-21页 |
1.3 内源性反转录病毒的天然免疫功能 | 第21-24页 |
2 长链非编码RNA研究进展 | 第24-31页 |
2.1 长链非编码RNA概述 | 第24-26页 |
2.2 长链非编码RNA作用机制 | 第26-29页 |
2.3 长链非编码RNA的天然免疫功能 | 第29-31页 |
3 DNA甲基转移酶抑制剂研究进展 | 第31-33页 |
3.1 DNA甲基转移酶抑制剂概述 | 第31-32页 |
3.2 DNA甲基转移酶抑制剂对基因表达的影响 | 第32-33页 |
4 研究目的和意义 | 第33-35页 |
第二章 DNA甲基化抑制剂5-Aza-dC激活鸡内源性反转录病毒并抑制ALVJ感染 | 第35-53页 |
1 前言 | 第35页 |
2 材料 | 第35-37页 |
2.1 细胞与病毒 | 第35-36页 |
2.2 主要试剂 | 第36页 |
2.3 主要仪器 | 第36-37页 |
3 方法 | 第37-44页 |
3.1 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第37页 |
3.2 5-Aza-dC处理鸡胚成纤维细胞 | 第37页 |
3.3 共聚焦间接免疫荧光试验 | 第37-38页 |
3.4 总蛋白提取 | 第38页 |
3.5 Western blot | 第38-39页 |
3.6 总RNA提取 | 第39页 |
3.7 转录组测序 | 第39-41页 |
3.8 cDNA合成和qRT-PCR | 第41-44页 |
4 结果与分析 | 第44-51页 |
4.1 5-Aza-dC处理鸡胚成纤维细胞浓度筛选 | 第44-45页 |
4.2 5-Aza-dC抑制J亚群禽白血病病毒增殖和入侵 | 第45-47页 |
4.3 RNA-Seq测序数据与质量评估 | 第47-48页 |
4.4 RNA-Seq结果验证 | 第48页 |
4.5 去甲基化试剂5-Aza-dC激活天然免疫相关基因表达 | 第48-49页 |
4.6 去甲基化试剂5-Aza-dC激活鸡内源性反转录病毒表达 | 第49-51页 |
5 讨论 | 第51-53页 |
第三章 源于鸡内源性反转录病毒ALVE1的lnc-ALVE1-AS1的鉴定 | 第53-71页 |
1 前言 | 第53页 |
2 材料 | 第53-55页 |
2.1 细胞与载体 | 第53页 |
2.2 主要试剂 | 第53-54页 |
2.3 主要仪器 | 第54-55页 |
3 方法 | 第55-62页 |
3.1 总RNA提取及纯化 | 第55页 |
3.2 RACE快速扩增转录子两端序列 | 第55-57页 |
3.3 Northerblot试验 | 第57-59页 |
3.4 生物信息学分析 | 第59页 |
3.5 RNA FISH试验 | 第59-60页 |
3.6 转录子编码蛋白能力验证 | 第60-62页 |
3.7 细胞转染 | 第62页 |
3.8 Westernbolt | 第62页 |
4 结果与分析 | 第62-68页 |
4.1 5'RACE和3'RACE鉴定转录子全长 | 第62-65页 |
4.2 Northern blot鉴定转录子 | 第65页 |
4.3 生物信息学预测转录子编码能力和二级结构 | 第65-67页 |
4.4 体外实验验证转录子编码能力 | 第67页 |
4.5 RNA FISH鉴定lnc-ALVE1-AS1亚细胞定位 | 第67-68页 |
5 讨论 | 第68-71页 |
第四章 长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1的天然免疫功能及分子机制 | 第71-93页 |
1 前言 | 第71页 |
2 材料 | 第71-72页 |
2.1 细胞、载体与病毒 | 第71页 |
2.2 主要试剂 | 第71-72页 |
2.3 主要仪器 | 第72页 |
3 方法 | 第72-78页 |
3.1 lnc-ALVE1-AS1过表达载体构建 | 第72-74页 |
3.2 细胞转染 | 第74页 |
3.3 qRT-PCR | 第74-75页 |
3.4 lnc-ALVE1-AS1 RNAi干扰试验 | 第75页 |
3.5 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) | 第75-76页 |
3.6 共聚焦免疫荧光 | 第76页 |
3.7 RNA Pulldown | 第76-77页 |
3.8 WesternBlot | 第77页 |
3.9 RNA FISH | 第77页 |
3.10 TLR3干扰试验 | 第77页 |
3.11 TLR3信号抑制试验 | 第77-78页 |
4 结果与分析 | 第78-90页 |
4.1 lnc-ALVE1-AS1过表达重组质粒的构建 | 第78-79页 |
4.2 lnc-ALVE1-AS1激活I型干扰素信号转录因子表达 | 第79-80页 |
4.3 干扰lnc-ALVE1-AS1抑制干扰素刺激基因表达 | 第80-82页 |
4.4 lnc-ALVE1-AS1抑制禽白血病病毒ALVJ增殖 | 第82-83页 |
4.5 lnc-ALVE1-AS1影响胞内核酸识别因子的表达水平 | 第83-84页 |
4.6 TLR3是lnc-ALVE1-AS1发挥天然免疫抗病毒反应的核酸识别因子 | 第84-90页 |
5 讨论 | 第90-93页 |
全文结论 | 第93-94页 |
主要创新点 | 第94页 |
进一步研究展望 | 第94-95页 |
参考文献 | 第95-106页 |
附录 | 第106-116页 |
致谢 | 第116-117页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第117-118页 |