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鸡内源性反转录病毒ALVE1的天然免疫功能及分子机制

中文摘要第3-6页
Abstract第6-9页
符号说明第14-16页
第一章 文献综述第16-35页
    1 内源性反转录病毒研究进展第16-24页
        1.1 内源性反转录病毒概述第16-18页
        1.2 内源性反转录病毒作用机制第18-21页
        1.3 内源性反转录病毒的天然免疫功能第21-24页
    2 长链非编码RNA研究进展第24-31页
        2.1 长链非编码RNA概述第24-26页
        2.2 长链非编码RNA作用机制第26-29页
        2.3 长链非编码RNA的天然免疫功能第29-31页
    3 DNA甲基转移酶抑制剂研究进展第31-33页
        3.1 DNA甲基转移酶抑制剂概述第31-32页
        3.2 DNA甲基转移酶抑制剂对基因表达的影响第32-33页
    4 研究目的和意义第33-35页
第二章 DNA甲基化抑制剂5-Aza-dC激活鸡内源性反转录病毒并抑制ALVJ感染第35-53页
    1 前言第35页
    2 材料第35-37页
        2.1 细胞与病毒第35-36页
        2.2 主要试剂第36页
        2.3 主要仪器第36-37页
    3 方法第37-44页
        3.1 鸡胚成纤维细胞的制备第37页
        3.2 5-Aza-dC处理鸡胚成纤维细胞第37页
        3.3 共聚焦间接免疫荧光试验第37-38页
        3.4 总蛋白提取第38页
        3.5 Western blot第38-39页
        3.6 总RNA提取第39页
        3.7 转录组测序第39-41页
        3.8 cDNA合成和qRT-PCR第41-44页
    4 结果与分析第44-51页
        4.1 5-Aza-dC处理鸡胚成纤维细胞浓度筛选第44-45页
        4.2 5-Aza-dC抑制J亚群禽白血病病毒增殖和入侵第45-47页
        4.3 RNA-Seq测序数据与质量评估第47-48页
        4.4 RNA-Seq结果验证第48页
        4.5 去甲基化试剂5-Aza-dC激活天然免疫相关基因表达第48-49页
        4.6 去甲基化试剂5-Aza-dC激活鸡内源性反转录病毒表达第49-51页
    5 讨论第51-53页
第三章 源于鸡内源性反转录病毒ALVE1的lnc-ALVE1-AS1的鉴定第53-71页
    1 前言第53页
    2 材料第53-55页
        2.1 细胞与载体第53页
        2.2 主要试剂第53-54页
        2.3 主要仪器第54-55页
    3 方法第55-62页
        3.1 总RNA提取及纯化第55页
        3.2 RACE快速扩增转录子两端序列第55-57页
        3.3 Northerblot试验第57-59页
        3.4 生物信息学分析第59页
        3.5 RNA FISH试验第59-60页
        3.6 转录子编码蛋白能力验证第60-62页
        3.7 细胞转染第62页
        3.8 Westernbolt第62页
    4 结果与分析第62-68页
        4.1 5'RACE和3'RACE鉴定转录子全长第62-65页
        4.2 Northern blot鉴定转录子第65页
        4.3 生物信息学预测转录子编码能力和二级结构第65-67页
        4.4 体外实验验证转录子编码能力第67页
        4.5 RNA FISH鉴定lnc-ALVE1-AS1亚细胞定位第67-68页
    5 讨论第68-71页
第四章 长链非编码RNA lnc-ALVE1-AS1的天然免疫功能及分子机制第71-93页
    1 前言第71页
    2 材料第71-72页
        2.1 细胞、载体与病毒第71页
        2.2 主要试剂第71-72页
        2.3 主要仪器第72页
    3 方法第72-78页
        3.1 lnc-ALVE1-AS1过表达载体构建第72-74页
        3.2 细胞转染第74页
        3.3 qRT-PCR第74-75页
        3.4 lnc-ALVE1-AS1 RNAi干扰试验第75页
        3.5 ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)第75-76页
        3.6 共聚焦免疫荧光第76页
        3.7 RNA Pulldown第76-77页
        3.8 WesternBlot第77页
        3.9 RNA FISH第77页
        3.10 TLR3干扰试验第77页
        3.11 TLR3信号抑制试验第77-78页
    4 结果与分析第78-90页
        4.1 lnc-ALVE1-AS1过表达重组质粒的构建第78-79页
        4.2 lnc-ALVE1-AS1激活I型干扰素信号转录因子表达第79-80页
        4.3 干扰lnc-ALVE1-AS1抑制干扰素刺激基因表达第80-82页
        4.4 lnc-ALVE1-AS1抑制禽白血病病毒ALVJ增殖第82-83页
        4.5 lnc-ALVE1-AS1影响胞内核酸识别因子的表达水平第83-84页
        4.6 TLR3是lnc-ALVE1-AS1发挥天然免疫抗病毒反应的核酸识别因子第84-90页
    5 讨论第90-93页
全文结论第93-94页
主要创新点第94页
进一步研究展望第94-95页
参考文献第95-106页
附录第106-116页
致谢第116-117页
攻读学位期间发表的学术论文目录第117-118页

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