| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| ·水稻条纹病毒 | 第11-14页 |
| ·水稻条纹叶枯病 | 第11页 |
| ·病毒粒子 | 第11-12页 |
| ·RSV基因组 | 第12页 |
| ·RSV编码的蛋白 | 第12-14页 |
| ·人工miRNA技术(artificial miRNA,amiRNA) | 第14-19页 |
| ·microRNA | 第14-15页 |
| ·人工miRNA技术原理 | 第15页 |
| ·amiRNA的设计与优化 | 第15-16页 |
| ·amiRNA基因构建 | 第16-17页 |
| ·amiRNA技术应用和影响因素 | 第17-18页 |
| ·前景 | 第18-19页 |
| ·本研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 针对水稻条纹病毒人工miRNA基因表达载体的构建 | 第20-31页 |
| ·材料与方法 | 第20-25页 |
| ·供试材料 | 第20页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-25页 |
| ·水稻基因组提取 | 第21-22页 |
| ·大量提取 | 第21-22页 |
| ·少量提取 | 第22页 |
| ·PCR反应体系和条件 | 第22页 |
| ·DNA片断切胶纯化 | 第22-23页 |
| ·连接反应 | 第23页 |
| ·T载体 | 第23页 |
| ·与pBI121载体的连接 | 第23页 |
| ·双酶切反应 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第24页 |
| ·转化和筛选 | 第24-25页 |
| ·质粒的少量提纯 | 第25页 |
| ·测序验证 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-30页 |
| ·amiRNA序列设计 | 第25-26页 |
| ·水稻天然miRNA前体的克隆 | 第26-27页 |
| ·amiRNA基因的构建 | 第27-29页 |
| ·amiR载体构建 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 人工miRNA基因对水稻的遗传转化和检测 | 第31-40页 |
| ·材料与方法 | 第31-34页 |
| ·水稻品种和农杆菌菌株 | 第31页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第31页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第31-32页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·农杆菌感受态细胞的电激转化 | 第32页 |
| ·重组转化子的PCR鉴定 | 第32页 |
| ·农杆菌的培养 | 第32页 |
| ·水稻幼胚愈伤组织的诱导培养 | 第32-33页 |
| ·水稻愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第33页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第33页 |
| ·抗性愈伤组织的分化 | 第33页 |
| ·生根、壮苗和移栽 | 第33页 |
| ·水稻总DNA基因组的提取 | 第33-34页 |
| ·转基因水稻植株的PCR鉴定 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-38页 |
| ·农杆菌的转化 | 第34-35页 |
| ·愈伤组织的诱导和培养 | 第35页 |
| ·农杆菌介导法遗传转化水稻条件的优化 | 第35-36页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第36页 |
| ·抗性愈伤组织的植株再生 | 第36页 |
| ·T_0代转基因水稻的检测 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 转基因水稻抗病毒特性分析 | 第40-48页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·供试材料 | 第40页 |
| ·仪器设备和试剂 | 第40页 |
| ·水稻培养 | 第40页 |
| ·灰飞虱的养殖 | 第40-41页 |
| ·ELISA法 | 第41页 |
| ·PCR检测 | 第41页 |
| ·Realtime-PCR检测 | 第41-43页 |
| ·水稻总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·反转录合成cDNA | 第42页 |
| ·Realtime-PCR反应体系 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·人工接种病毒条件 | 第43页 |
| ·抗RSV分析 | 第43-45页 |
| ·amiRNA在转基因水稻中的表达特性分析 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 结论和进一步研究建议 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·进一步研究建议 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录 | 第54-57页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |