| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词(Abbreviations) | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-19页 |
| 参考文献 | 第16-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-73页 |
| 第一章 MSTN基因研究进展 | 第19-41页 |
| 1 基因结构与蛋白成熟 | 第19-20页 |
| 2 MSTN信号通路与主要生理作用 | 第20-22页 |
| 2.1 MSTN的主要信号通路 | 第20-21页 |
| 2.2 MSTN抑制肌卫星细胞的增殖和分化 | 第21页 |
| 2.3 MSTN调控蛋白合成与降解 | 第21-22页 |
| 3 MSTN自然突变与KO的性状评估 | 第22-32页 |
| 3.1 MSTN多态性 | 第22-25页 |
| 3.2 MSTN KO | 第25-30页 |
| 3.3 双肌性状效应的评估 | 第30-32页 |
| 4 MSTN在家畜育种应用 | 第32-34页 |
| 4.1 MSTN突变富集和导入 | 第33页 |
| 4.2 建立MSTN突变的杂交配套系 | 第33-34页 |
| 5 MSTN研究的展望 | 第34页 |
| 参考文献 | 第34-41页 |
| 第二章 CLPG性状研究进展 | 第41-57页 |
| 1 CLPG性状 | 第41-42页 |
| 1.1 生长、屠宰和肉质性状 | 第41-42页 |
| 1.2 繁殖和健康性状 | 第42页 |
| 2 CLPG性状形成的分子机理 | 第42-49页 |
| 2.1 DLK1-DIO3印记基因簇 | 第42-46页 |
| 2.2 CLPG性状形成的模型 | 第46-49页 |
| 3 CLPG (DLK1)通路与MSTN通路 | 第49-50页 |
| 3.1 MSTN KO上调DLK1-DIO3印记基因簇的基因表达 | 第49-50页 |
| 3.2 CLPG性状(DLK1过表达)下调MSTN的表达 | 第50页 |
| 4 DLK1和CLPG1的其他SNP与性状的关系 | 第50-51页 |
| 5 CLPG性状的研究展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 第三章 CRISPR/Cas9技术应用研究进展 | 第57-73页 |
| 1 CRISPR/Cas9系统的历史与基因编辑原理 | 第57-58页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统是古细菌与细菌的免疫系统 | 第57-58页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9介导基因编辑的原理 | 第58页 |
| 2 CRISPR/Cas9技术在家畜育种中的应用以及存在的问题 | 第58-63页 |
| 2.1 家畜育种 | 第58-60页 |
| 2.2 Cas9基因编辑存在的主要问题与解决策略 | 第60-63页 |
| 3 CRISPR/Cas9系统的其他应用 | 第63-65页 |
| 3.1 染色体结构编辑 | 第63-64页 |
| 3.2 dCas9-效应蛋白的应用 | 第64-65页 |
| 3.3 全基因组功能基因筛选 | 第65页 |
| 4 结语 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 第二部分 试验研究 | 第73-143页 |
| 第四章 Cas9介导兔MSTN基因编辑的研究 | 第73-105页 |
| 1 材料与方法 | 第74-85页 |
| 1.1 实验动物 | 第74页 |
| 1.2 主要仪器及耗材 | 第74-75页 |
| 1.3 主要试剂 | 第75-76页 |
| 1.4 试验方法 | 第76-85页 |
| 2 试验结果 | 第85-99页 |
| 2.1 兔MSTN特异sgRNA的设计与载体构建 | 第85-86页 |
| 2.2 Cas9 mRNA和sgRNA的体外转录 | 第86-87页 |
| 2.3 胚胎水平验证CRISPR/sgR1和sgR2的基因编辑效率 | 第87-89页 |
| 2.4 MSTNKO兔的生产 | 第89页 |
| 2.5 仔兔基因编辑检测 | 第89-91页 |
| 2.6 双sgRNA介导长片段缺失 | 第91-92页 |
| 2.7 MSTNKO与仔兔大舌头现象和高死亡率的关系 | 第92-94页 |
| 2.8 MSTNKO对仔兔肌肉重量和出生体重的影响 | 第94-96页 |
| 2.9 仔兔MSTN蛋白表达和成肌转录因子(Myogenin)的表达检测 | 第96-98页 |
| 2.10 仔兔各器官的基因编辑检测 | 第98页 |
| 2.11 sgR1和sgR2的脱靶分析 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 3.1 Cas9介导兔基因编辑的效率 | 第99-100页 |
| 3.2 Cas9介导基因编辑的特异性 | 第100-101页 |
| 3.3 MSTNKO动物的性状变化 | 第101页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 第五章 Cas9介导山羊MSTN基因编辑的研究 | 第105-121页 |
| 1 材料与方法 | 第105-109页 |
| 1.1 实验动物 | 第105页 |
| 1.2 主要仪器 | 第105-106页 |
| 1.3 主要试剂 | 第106页 |
| 1.4 试验方法 | 第106-109页 |
| 2 试验结果 | 第109-115页 |
| 2.1 山羊MSTN特异sgRNA设计、载体构建与sgRNA体外转录 | 第109-110页 |
| 2.2 MSTNKO山羊的生产 | 第110页 |
| 2.3 羔羊基因编辑检测 | 第110-111页 |
| 2.4 其他器官基因编辑检测 | 第111-112页 |
| 2.5 羔羊#298-3 MSTN蛋白序列突变分析 | 第112-114页 |
| 2.6 MSTN KO山羊大舌头现象 | 第114-115页 |
| 2.7 sgG脱靶分析 | 第115页 |
| 3 讨论 | 第115-118页 |
| 3.1 基因编辑的嵌合体现象以及CPI技术与SCNT技术的比较 | 第115-117页 |
| 3.2 Cas9系统高低浓度对基因编辑效率的影响 | 第117页 |
| 3.3 Cas9基因编辑的可遗传性 | 第117页 |
| 3.4 MSTNKO山羊的大舌现象 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-121页 |
| 第六章 Cas9介导兔CLPG1基因编辑的研究 | 第121-135页 |
| 1 材料与方法 | 第122-123页 |
| 1.1 实验动物、仪器、耗材和试剂 | 第122页 |
| 1.2 试验方法 | 第122-123页 |
| 2 试验结果 | 第123-131页 |
| 2.1 兔CLPG1基因组定位和哺乳动物CLPG1基因的多种比较 | 第123-124页 |
| 2.2 兔CLPG1特异sgRNA的设计、载体构建和体外转录 | 第124-125页 |
| 2.3 胚胎水平检测sgRNA的基因编辑效率 | 第125-129页 |
| 2.4 CLPG1基因编辑兔的生产 | 第129页 |
| 2.5 CLPG1基因编辑检测 | 第129-131页 |
| 3 讨论 | 第131-132页 |
| 3.1 高GC含量的CLPG1基因编辑效率分析 | 第131页 |
| 3.2 CLPG1 SNP与CLPG1 KO | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-135页 |
| 第七章 Cas9介导山羊CLPG1基因编辑的研究 | 第135-143页 |
| 1 材料与方法 | 第135-137页 |
| 1.1 实验动物 | 第135-136页 |
| 1.2 主要仪器和试剂 | 第136页 |
| 1.3 试验方法 | 第136-137页 |
| 2 试验结果 | 第137-141页 |
| 2.1 山羊CLPG1多态性分析 | 第137-139页 |
| 2.2 山羊CLPG1特异sgRNA设计、载体构建与体外转录 | 第139-140页 |
| 2.3 CLPG1 KO山羊的生产 | 第140页 |
| 2.4 羔羊基因编辑检测 | 第140-141页 |
| 3 讨论 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-143页 |
| 全文结论 | 第143-145页 |
| 创新点 | 第145-147页 |
| 进一步研究的内容 | 第147-149页 |
| 附录 | 第149-151页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第151-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
