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小鼠胚胎干细胞分化过程中通过Pax6-GFP报告基因系统高效获得神经祖细胞的研究

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
英汉缩略名词对照表第6-10页
第一章 引言第10-18页
    第一节 神经发育第10-11页
        1.1.1 神经发生及神经性疾病的影响第10-11页
        1.1.2 Pax6基因在神经谱系中的作用第11页
    第二节 神经诱导第11-14页
        1.2.1 神经祖细胞的特性第11-13页
        1.2.2 小鼠神经祖细胞(mNPCs)的分化第13-14页
    第三节 基因编辑技术及基因报告系统第14-16页
        1.3.1 基因编辑技术简介第14-15页
        1.3.2 利用基因编辑技术构建基因报告系统第15-16页
    第四节 实验设计第16-18页
第二章 材料和方法第18-38页
    第一节 实验材料、试剂和仪器第18-21页
        2.1.1 实验细胞和动物来源第18页
        2.1.2 主要试剂第18-20页
        2.1.3 主要实验仪器和耗材第20-21页
    第二节 主要溶液的配制第21-26页
        2.2.1 成纤维细胞(MEF)培养基第21页
        2.2.2 小鼠胚胎干细胞(mESCs)培养基第21-22页
        2.2.3 小鼠拟胚体细胞(EB)培养基第22页
        2.2.4 体外定向诱导神经分化培养基第22-23页
        2.2.5 神经祖细胞(NPCs)培养基第23页
        2.2.6 体外定向诱导少突细胞和神经元培养基第23-24页
        2.2.7 体外定向诱导星型胶质细胞培养基第24页
        2.2.8 细胞冻存液的配置第24-25页
        2.2.9 电生理实验内液外液的配置第25页
        2.2.10 磷酸盐缓冲液(PBS)的配置第25-26页
    第三节 实验方法第26-38页
        2.3.1 饲养层细胞的制备第26-27页
        2.3.2 小鼠胚胎干细胞系的建系第27-28页
        2.3.3 Pax6-GFP质粒构建第28-30页
        2.3.4 Pax6-GFP胚胎干细胞建系第30-33页
        2.3.5 定向神经祖细胞分化第33页
        2.3.6 免疫荧光检测第33-34页
        2.3.7 流式细胞仪分选第34-35页
        2.3.8 神经祖细胞蛋白表达检测第35页
        2.3.9 体内神经谱系分化检测第35-36页
        2.3.10 下游神经元分化检测第36页
        2.3.11 神经元功能性检测第36-37页
        2.3.12 统计学分析第37-38页
第三章 实验结果第38-50页
    第一节 利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pax6-GFP报告系统第38-41页
    第二节 潜在脱靶位点检测验证了两条sgRNA没有出现脱靶现象第41-43页
    第三节 利用Pax6-GFP报告系统高效获得mNPCs第43-46页
    第四节 利用Pax6-GFP系统获得的mNPCs具有完整的功能特性第46-48页
    第五节 在mESCs培养基中添加小分子抑制剂后可提高mNPCs的分化效率第48-50页
第四章 讨论第50-53页
参考文献第53-56页
个人简历第56-59页
附录 A (研究论文)第59-83页
致谢第83页

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