| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英汉缩略名词对照表 | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| 第一节 神经发育 | 第10-11页 |
| 1.1.1 神经发生及神经性疾病的影响 | 第10-11页 |
| 1.1.2 Pax6基因在神经谱系中的作用 | 第11页 |
| 第二节 神经诱导 | 第11-14页 |
| 1.2.1 神经祖细胞的特性 | 第11-13页 |
| 1.2.2 小鼠神经祖细胞(mNPCs)的分化 | 第13-14页 |
| 第三节 基因编辑技术及基因报告系统 | 第14-16页 |
| 1.3.1 基因编辑技术简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 利用基因编辑技术构建基因报告系统 | 第15-16页 |
| 第四节 实验设计 | 第16-18页 |
| 第二章 材料和方法 | 第18-38页 |
| 第一节 实验材料、试剂和仪器 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验细胞和动物来源 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.3 主要实验仪器和耗材 | 第20-21页 |
| 第二节 主要溶液的配制 | 第21-26页 |
| 2.2.1 成纤维细胞(MEF)培养基 | 第21页 |
| 2.2.2 小鼠胚胎干细胞(mESCs)培养基 | 第21-22页 |
| 2.2.3 小鼠拟胚体细胞(EB)培养基 | 第22页 |
| 2.2.4 体外定向诱导神经分化培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.5 神经祖细胞(NPCs)培养基 | 第23页 |
| 2.2.6 体外定向诱导少突细胞和神经元培养基 | 第23-24页 |
| 2.2.7 体外定向诱导星型胶质细胞培养基 | 第24页 |
| 2.2.8 细胞冻存液的配置 | 第24-25页 |
| 2.2.9 电生理实验内液外液的配置 | 第25页 |
| 2.2.10 磷酸盐缓冲液(PBS)的配置 | 第25-26页 |
| 第三节 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.3.1 饲养层细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.3.2 小鼠胚胎干细胞系的建系 | 第27-28页 |
| 2.3.3 Pax6-GFP质粒构建 | 第28-30页 |
| 2.3.4 Pax6-GFP胚胎干细胞建系 | 第30-33页 |
| 2.3.5 定向神经祖细胞分化 | 第33页 |
| 2.3.6 免疫荧光检测 | 第33-34页 |
| 2.3.7 流式细胞仪分选 | 第34-35页 |
| 2.3.8 神经祖细胞蛋白表达检测 | 第35页 |
| 2.3.9 体内神经谱系分化检测 | 第35-36页 |
| 2.3.10 下游神经元分化检测 | 第36页 |
| 2.3.11 神经元功能性检测 | 第36-37页 |
| 2.3.12 统计学分析 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-50页 |
| 第一节 利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pax6-GFP报告系统 | 第38-41页 |
| 第二节 潜在脱靶位点检测验证了两条sgRNA没有出现脱靶现象 | 第41-43页 |
| 第三节 利用Pax6-GFP报告系统高效获得mNPCs | 第43-46页 |
| 第四节 利用Pax6-GFP系统获得的mNPCs具有完整的功能特性 | 第46-48页 |
| 第五节 在mESCs培养基中添加小分子抑制剂后可提高mNPCs的分化效率 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 个人简历 | 第56-59页 |
| 附录 A (研究论文) | 第59-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
