| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 疼痛及其分类 | 第11-12页 |
| 1.2 目前常用镇痛药 | 第12-13页 |
| 1.3 动物源镇痛药的研究 | 第13-14页 |
| 1.3.1 蛇毒镇痛活性物质及其作用 | 第13-14页 |
| 1.3.2 蝎毒镇痛活性物质及其作用 | 第14页 |
| 1.3.3 蜘蛛毒镇痛活性物质及其作用 | 第14页 |
| 1.4 两栖类皮肤活性物质 | 第14-18页 |
| 1.4.1 两栖类抗菌肽 | 第15-16页 |
| 1.4.2 速激肽和缓激肽 | 第16页 |
| 1.4.3 抗氧化多肽 | 第16页 |
| 1.4.4 酶调节剂和抑制剂 | 第16-17页 |
| 1.4.5 两栖类镇痛多肽 | 第17-18页 |
| 1.5 常见的疼痛模型 | 第18-20页 |
| 1.5.1 物理性痛疼模型 | 第18-19页 |
| 1.5.2 化学性刺激模型 | 第19-20页 |
| 1.6 秦岭雨蛙生物学特征简介与雨蛙皮肤镇痛肽的研究意义 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究的主要内容 | 第21-23页 |
| 第二章 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽cDNA文库的构建及镇痛肽基因筛选 | 第23-41页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 材料 | 第24-26页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.2.2 试剂和酶 | 第24-25页 |
| 2.2.3 常用溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第26页 |
| 2.3 方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽上游简并引物设计 | 第26-27页 |
| 2.3.2 秦岭雨蛙总RNA的提取和mRNA分离 | 第27-28页 |
| 2.3.3 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽cDNA克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.4 PCR产物回收 | 第29-30页 |
| 2.3.5 目的片段与载体连接及其产物纯化 | 第30页 |
| 2.3.6 电转化感受态细胞的制备和电转化 | 第30-31页 |
| 2.3.7 镇痛肽目的基因筛选 | 第31-33页 |
| 2.3.8 DNA测序 | 第33页 |
| 2.4 结果 | 第33-37页 |
| 2.4.1 总RNA的检测 | 第33-34页 |
| 2.4.2 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽基因cDNA克隆结果 | 第34-35页 |
| 2.4.3 镇痛肽基因的筛选 | 第35-36页 |
| 2.4.4 DNA测序 | 第36-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 2.6 小结 | 第38-41页 |
| 第三章 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽生物信息学分析 | 第41-49页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-42页 |
| 3.2.1 镇痛肽序列分析 | 第41-42页 |
| 3.2.2 镇痛肽的理化性质分析 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-47页 |
| 3.3.1 核苷酸序列比对 | 第42页 |
| 3.3.2 氨基酸序列比对 | 第42-45页 |
| 3.3.3 成熟镇痛肽 | 第45-46页 |
| 3.3.4 理化性质预测结果 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 人工合成秦岭雨蛙皮肤镇痛肽的镇痛活性测定 | 第49-55页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第49页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第49-50页 |
| 4.2.3 常用溶液配制 | 第50页 |
| 4.2.4 仪器设备 | 第50页 |
| 4.3 方法 | 第50-52页 |
| 4.3.1 镇痛肽的合成 | 第50页 |
| 4.3.2 镇痛活性检测 | 第50-52页 |
| 4.4 结论 | 第52-53页 |
| 4.4.1 醋酸扭体实验结果 | 第52页 |
| 4.4.2 热板实验结果 | 第52-53页 |
| 4.5 讨论 | 第53页 |
| 4.6 小结 | 第53-55页 |
| 第五章 人工合成秦岭雨蛙皮肤镇痛肽其他生物功能测定 | 第55-63页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 材料 | 第55-57页 |
| 5.2.1 测试细胞 | 第55页 |
| 5.2.2 试剂和培养基 | 第55页 |
| 5.2.3 常用溶液配制 | 第55-57页 |
| 5.2.4 仪器设备 | 第57页 |
| 5.3 方法 | 第57-60页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第57-58页 |
| 5.3.2 MTT实验 | 第58-59页 |
| 5.3.3 肥大细胞脱颗粒实验 | 第59-60页 |
| 5.3.4 抗氧化实验 | 第60页 |
| 5.4 结果 | 第60-62页 |
| 5.4.1 MTT实验结果 | 第60-61页 |
| 5.4.2 肥大细胞脱颗粒结果 | 第61页 |
| 5.4.3 抗氧化结果 | 第61-62页 |
| 5.5 讨论 | 第62页 |
| 5.6 小结 | 第62-63页 |
| 第六章 秦岭雨蛙皮肤镇痛肽的镇痛机制初步研究 | 第63-69页 |
| 6.1 引言 | 第63页 |
| 6.2 材料 | 第63-65页 |
| 6.2.1 实验细胞 | 第63页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 6.2.3 常用溶液配制 | 第64-65页 |
| 6.2.4 仪器设备 | 第65页 |
| 6.3 实验方法 | 第65-66页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第65页 |
| 6.3.2 玻璃微电极制备 | 第65页 |
| 6.3.3 样品处理 | 第65-66页 |
| 6.3.4 全细胞记录 | 第66页 |
| 6.4 实验结果 | 第66-67页 |
| 6.4.1 钠离子通道与钾离子通道的斜坡刺激(ramp)结果 | 第66-67页 |
| 6.4.2 TRPV1通道实验结果 | 第67页 |
| 6.5 讨论 | 第67-68页 |
| 6.6 小结 | 第68-69页 |
| 第七章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 附录 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
