| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| ·研究背景 | 第14-21页 |
| ·幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori) | 第14-15页 |
| ·幽门螺杆菌cag致病岛 | 第15-17页 |
| ·Ⅳ型分泌系统(type Ⅳ secretion system,TFSS) | 第17-19页 |
| ·幽门螺杆菌伴侣蛋白 | 第19-21页 |
| ·本研究的目的、内容及技术路线 | 第21-23页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 幽门螺杆菌cagL基因的克隆及序列分析 | 第23-35页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·主要溶液及配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·H.pylori的培养与鉴定 | 第26页 |
| ·H.pylori基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·PCR引物的设计 | 第26-27页 |
| ·PCR反应 | 第27页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第27-28页 |
| ·制备感受态细胞 | 第28页 |
| ·目的片段的T-A克隆 | 第28-29页 |
| ·转化与筛选 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒中目的基因序列测序 | 第30页 |
| ·H.pylori CagL基因的序列分析 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-33页 |
| ·H.pylori的分离培养与鉴定 | 第30页 |
| ·cagL基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组质粒测序结果和生物信息学分析 | 第31-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 幽门螺杆菌cagL基因的原核表达及抗体制备 | 第35-47页 |
| ·材料 | 第35-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液配制 | 第36-38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)-cagL的构建与鉴定 | 第39页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与鉴定 | 第39-40页 |
| ·目的蛋白可溶性分析 | 第40页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·目的蛋白的复性 | 第40-41页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第41页 |
| ·多克隆抗体的制备及Western blot鉴定 | 第41页 |
| ·抗体效价检测 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-45页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)-cagL的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与鉴定 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
| ·抗体效价的ELISA法分析及Western blot鉴定 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 CagL融合蛋白对GES-1细胞IL-8 mRNA表达的影响 | 第47-52页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·细胞 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要溶液配制 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·细胞培养 | 第48页 |
| ·融合蛋白对细胞因子IL-8mRNA表达的影响 | 第48页 |
| ·RNA提取 | 第48页 |
| ·逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-8mRNA的表达 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 幽门螺杆菌CagL亚细胞定位及中和作用 | 第52-58页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·细胞与菌株 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·主要溶液配制 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·细菌和细胞的培养 | 第53页 |
| ·细菌亚细胞组分的分离 | 第53-54页 |
| ·Western blot检测CagL蛋白的亚细胞定位 | 第54页 |
| ·CagL多克隆抗体中和前后CagA蛋白转运实验 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·CagL蛋白亚细胞定位的鉴定 | 第54-55页 |
| ·CagL中和前后对CagA蛋白转运能力的影响 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第六章 主要结论和展望 | 第58-59页 |
| ·主要结论 | 第58页 |
| ·展望 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读硕士期间发表论文与参加课题 | 第66页 |
