| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 实硷试剂、仪器和材料 | 第17-25页 |
| 1.1 实验仪器 | 第17页 |
| 1.2 实验试剂和材料 | 第17-25页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第17-18页 |
| 1.2.2 主要材料 | 第18页 |
| 1.2.3 主要试剂配制 | 第18-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.1 家系收集 | 第25页 |
| 2.1.1 家系调查与病史询问 | 第25页 |
| 2.1.2 样本采集 | 第25页 |
| 2.1.3 病例诊断 | 第25页 |
| 2.2 外周血基因组DNA抽提 | 第25-26页 |
| 2.3 聚合酶链式反应 | 第26-27页 |
| 2.4 突变检测 | 第27-29页 |
| 2.4.1 候选基因引物的设计 | 第27-29页 |
| 2.4.2 对各候选基因进行PCR扩增及测序 | 第29页 |
| 2.4.3 测序结果分析 | 第29页 |
| 2.5 分子克隆相关实验 | 第29-32页 |
| 2.5.1 超级感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| 2.5.2 目的片段合成 | 第30页 |
| 2.5.3 琼脂糖凝胶电泳纯化及回收目的片段 | 第30-31页 |
| 2.5.4 酶切 | 第31页 |
| 2.5.5 T4 DNA ligase酶连 | 第31-32页 |
| 2.5.6 质粒转化 | 第32页 |
| 2.5.7 挑取单克隆提取质粒以及酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.6 细胞复苏、培养、传代以及细胞冻存 | 第32-33页 |
| 2.6.1 细胞复苏 | 第32页 |
| 2.6.2 细胞培养、传代 | 第32-33页 |
| 2.6.3 细胞冻存 | 第33页 |
| 2.7 细胞转染 | 第33页 |
| 2.8 RNA提取以及反转录得到CDNA | 第33-35页 |
| 2.8.1 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.8.2 反转录cDNA | 第34-35页 |
| 2.9 免疫荧光 | 第35页 |
| 2.10 REAL TIME PCR | 第35-36页 |
| 2.11 蛋白样品制备与处理 | 第36页 |
| 2.12 DYE UPTAKE ASSAY检测CONNEXIN的半通道功能 | 第36页 |
| 2.13 免疫印迹WESTERN BLOT | 第36-38页 |
| 2.13.1 配制SDS-PAGE蛋白变性胶 | 第36-37页 |
| 2.13.2 蛋白样处理及上样 | 第37页 |
| 2.13.3 蛋白电泳以及转膜 | 第37-38页 |
| 2.13.4 PVDF膜封闭以及抗体孵育 | 第38页 |
| 2.13.5 发光鉴定 | 第38页 |
| 2.14 MTS法检测细胞增殖速率 | 第38-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-55页 |
| 3.1 Cx46移码突变(CX46FS400)可能是先天性白内障的诱因 | 第41-45页 |
| 3.1.1 家系一临床诊断与遗传学分析 | 第41-42页 |
| 3.1.2 家系一致病基因的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.3 生物信息学分析Cx46突变对其蛋白结构的影响 | 第43页 |
| 3.1.4 生物信息学分析Cx46突变对其蛋白结构的影响 | 第43-44页 |
| 3.1.5 GJA3移码突变导致Cx46在病人晶状体组织中表达量下降 | 第44-45页 |
| 3.2 在一常染色体显性遗传的先天性白内障家系（家系二）中鉴定发现Cx50发生插入突变（Cx50-95 insert） | 第45-55页 |
| 3.2.1 家系二临床诊断与遗传学分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2 家系致病基因筛查与鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.3 Cx50突变位点附近氨基酸序列具有高度保守性 | 第47-48页 |
| 3.2.4 Cx50-95 insert导致Cx50膜定位方式发生改变 | 第48页 |
| 3.2.5 Cx50-95insert突变诱发Cx50半通道功能受损 | 第48-49页 |
| 3.2.6 过表达Cx50-WT和Cx50-95insert诱导HLE发生ER-Stress | 第49-50页 |
| 3.2.7 Cx50-95insert与溶酶体发生共定位 | 第50-51页 |
| 3.2.8 Cx50-95insert未能明显改变HLE细胞增殖速率 | 第51-52页 |
| 3.2.9 Cx50在小鼠晶状体中表达情况 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 综述 | 第61-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 在读期间参加学术活动以及研究成果、奖励 | 第75页 |
