| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 辣椒疫霉简介 | 第14-15页 |
| 1.2 2 -酮戊二酸依赖性双加氧酶家族简介 | 第15-24页 |
| 1.2.1 脯氨酸羟化酶研究进展 | 第18-24页 |
| 1.2.1.1 胶原蛋白脯氨酸羟化酶研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1.2 低氧诱导因子脯氨酸羟化酶研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.1.3 植物源脯氨酸羟化酶研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2.1.4 其它物种脯氨酸羟化酶研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 蛋白质结构解析常用方法 | 第24-25页 |
| 1.4 X-射线衍射晶体学 | 第25-33页 |
| 1.4.1 蛋白质结晶的原理 | 第25-26页 |
| 1.4.2 蛋白质结晶技术 | 第26-27页 |
| 1.4.3 晶体的X-射线衍射理论 | 第27-28页 |
| 1.4.4 相位解析和模型构建 | 第28-32页 |
| 1.4.5 结构精修 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-50页 |
| 2.1 供试材料 | 第34-38页 |
| 2.1.1 载体与菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 酶及相关生化试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.3 仪器 | 第35页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第35页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第35-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-50页 |
| 2.2.1 辣椒疫霉脯氨酸羟化酶基因预测及进化树构建 | 第38页 |
| 2.2.2 低氧胁迫和侵染试验 | 第38-39页 |
| 2.2.3 试剂盒法提取总RNA | 第39-40页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一链的合成 | 第40页 |
| 2.2.5 PcP4Hs表达模式分析 | 第40-41页 |
| 2.2.6 PcP4H1基因克隆及原核表达载体构建 | 第41-42页 |
| 2.2.6.1 PcP4H1基因克隆 | 第41-42页 |
| 2.2.6.2 原核表达载体构建与鉴定 | 第42页 |
| 2.2.7 重组蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 重组蛋白的试表达 | 第42-43页 |
| 2.2.7.2 重组蛋白的扩大培养 | 第43页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.8.1 固相金属离子亲和层析纯化 | 第43页 |
| 2.2.8.2 离子交换层析纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.8.3 分子筛层析纯化 | 第44页 |
| 2.2.9 2 -酮戊二酸亲和力分析 | 第44-45页 |
| 2.2.10 PcP4H1酶活力测定 | 第45-46页 |
| 2.2.11 PcP4H1蛋白结晶筛选与优化 | 第46页 |
| 2.2.12 晶体衍射数据的收集与处理 | 第46-48页 |
| 2.2.13 硒代蛋白的表达纯化 | 第48页 |
| 2.2.14 硒代蛋白结晶与优化 | 第48页 |
| 2.2.15 硒代晶体衍射数据的收集与处理 | 第48页 |
| 2.2.16 筛选辣椒疫霉PcP4H1沉默转化株 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-71页 |
| 3.1 辣椒疫霉基因组含有5个PcP4Hs基因 | 第50-52页 |
| 3.2 PcP4Hs表达模式分析 | 第52-54页 |
| 3.3 PcP4H1与2-酮戊二酸的亲和力分析 | 第54-56页 |
| 3.3.1 PcP4H1原核表达及蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.2 PcP4H1与2-酮戊二酸的亲和力分析 | 第55-56页 |
| 3.4 PcP4H1酶活力检测 | 第56-57页 |
| 3.5 PcP4H1三维结构的解析 | 第57-63页 |
| 3.5.1 PcP4H1晶体的获得与衍射数据收集 | 第57-58页 |
| 3.5.2 SeMet-PcP4H1晶体的获得与衍射数据收集 | 第58-61页 |
| 3.5.3 衍射数据处理 | 第61-62页 |
| 3.5.4 PcP4H1结构解析 | 第62-63页 |
| 3.6 PcP4H1的晶体结构 | 第63-70页 |
| 3.6.1 PcP4H1的整体结构介绍 | 第63-65页 |
| 3.6.2 PcP4H1的活性位点分析 | 第65-68页 |
| 3.6.3 PcP4H1的底物结合模式 | 第68-70页 |
| 3.7 PcP4H1沉默转化子的获得与表型分析 | 第70-71页 |
| 4 结论与讨论 | 第71-74页 |
| 4.1 PcP4Hs生物学功能特性 | 第71-72页 |
| 4.2 PcP4H1蛋白结构特性 | 第72-74页 |
| 5 其它工作总结 | 第74-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 论文发表情况 | 第91页 |
