| 摘要 | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-14页 |
| 1 黑色素的研究进展 | 第9-12页 |
| 1.1 黑色素的发现 | 第9页 |
| 1.2 黑色素的化学本质、结构 | 第9页 |
| 1.3 黑色素细胞的发生 | 第9页 |
| 1.4 黑色素的合成与运输 | 第9-10页 |
| 1.5 黑色素的生物化学功能 | 第10-11页 |
| 1.6 酪氨酸家族相关基因(TYR、TYRP1和TYRP2)在黑色素合成过程中的调控 | 第11-12页 |
| 2 miRNA对毛色调控的作用机理 | 第12-13页 |
| 2.1 miRNA的生成和结构 | 第12页 |
| 2.2 miRNA的作用机制 | 第12页 |
| 2.3 miRNA与靶基因的结合调控 | 第12-13页 |
| 2.4 miRNA对毛色的调控 | 第13页 |
| 3 本试验的研究目的和意义 | 第13-14页 |
| 材料与方法 | 第14-27页 |
| 1 实验材料 | 第14-15页 |
| 1.1 实验仪器 | 第14页 |
| 1.2 培养小鼠黑色素细胞实验试剂与耗材 | 第14页 |
| 1.3 双荧光报告载体构建,质粒中提实验试剂与耗材 | 第14页 |
| 1.4 小鼠黑色素细胞总RNA的提取,qRT-PCR实验试剂与耗材 | 第14页 |
| 1.5 小鼠黑色素细胞总蛋白提取,蛋白印迹实验试剂和耗材 | 第14-15页 |
| 2 实验方法 | 第15-27页 |
| 2.1 小鼠黑色素细胞的培养 | 第15-16页 |
| 2.2 miR-146a靶基因预测与筛选和pmirGLO-TYRP1-3'UTR双荧光报告载体及其突变载体的构建 | 第16-19页 |
| 2.3 miR-146a和TYRP1靶向关系验证 | 第19-20页 |
| 2.4 miR-146a mimic转染小鼠黑色素细胞 | 第20-21页 |
| 2.5 小鼠黑色素细胞中黑色素含量的测定 | 第21页 |
| 2.6 小鼠黑色素细胞RNA提取和实时荧光定量PCR检测 | 第21-24页 |
| 2.7 黑色素细胞总蛋白提取和Western Blot检测 | 第24-27页 |
| 实验结果 | 第27-32页 |
| 1 miR-146a-5p的生物信息学分析和TYRP1靶基因预测 | 第27页 |
| 2 TYRP13' UTR的PCR扩增及克隆与pmirGLO-TYRP13' UTR的构建 | 第27-28页 |
| 3 pmirGLO-TYRP13' UTR突变及测序 | 第28-29页 |
| 4 双荧光报告检测结果 | 第29页 |
| 5 miR-146a对小鼠黑色素细胞黑色素产生的影响 | 第29-30页 |
| 6 miR-146a对TYRP1及其家族基因mRNA表达的影响 | 第30-31页 |
| 6.1 小鼠黑色素细胞总RNA完整性和纯度的鉴定 | 第30页 |
| 6.2 小鼠黑色素细胞转染后miR-146a, TYR,TYRP1,TYRP2 mRNA表达水平 | 第30-31页 |
| 7 转染miR-146a后对TYRP1及其家族蛋白表达的影响 | 第31-32页 |
| 讨论 | 第32-33页 |
| 结论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-39页 |
| Abstract | 第39-40页 |
| 附录 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
