| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 藏药植物马尿泡 | 第10-11页 |
| 1.2 托品烷生物碱 | 第11页 |
| 1.3 托品烷生物碱的代谢网络概述 | 第11-16页 |
| 1.3.1 腐胺N-甲基转移酶PMT | 第12-13页 |
| 1.3.2 氮甲基腐胺氧化酶MPO | 第13页 |
| 1.3.3 托品酮还原酶TRs | 第13-15页 |
| 1.3.4 芳香族氨基转移酶ArAT | 第15页 |
| 1.3.5 细胞色素氧化酶CYP80F1 | 第15页 |
| 1.3.6 莨菪碱6β-羟化酶H6H | 第15-16页 |
| 1.4 托品烷生物碱的合成运输及储存 | 第16页 |
| 1.5 托品酮还原酶在托品烷生物碱代谢工程中应用的研究进展 | 第16-18页 |
| 第2章 绪论 | 第18-20页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第18页 |
| 2.2 研究内容 | 第18页 |
| 2.3 技术路线 | 第18-20页 |
| 第3章 材料与方法 | 第20-38页 |
| 3.1 实验材料及试剂耗材 | 第20-22页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 3.1.3 仪器和设备 | 第20页 |
| 3.1.4 试剂和试剂盒购买 | 第20-21页 |
| 3.1.5 常规试剂和培养基的配置 | 第21-22页 |
| 3.2 常规方法和操作步骤 | 第22-24页 |
| 3.2.1 植物总RNA的提取与检测 | 第22页 |
| 3.2.2 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| 3.2.3 PCR目的条带的回收 | 第22页 |
| 3.2.4 连接反应 | 第22-23页 |
| 3.2.5 大肠杆菌DH5α及Rosetta感受态细胞的制备 | 第23页 |
| 3.2.6 大肠杆菌的转化及筛选阳性单板 | 第23页 |
| 3.2.7 重组子的鉴定与测序 | 第23页 |
| 3.2.8 质粒的提取 | 第23-24页 |
| 3.3 PtTRI和PtTRII的克隆和分析 | 第24-34页 |
| 3.3.1 从马尿泡总RNA合成第一链cDNA | 第24-25页 |
| 3.3.2 PtTRI全长cDNA的获取 | 第25-28页 |
| 3.3.3 PtTRII的全长cDNA获取 | 第28-30页 |
| 3.3.4 PtTRI和PtTRII的生物信息学分析 | 第30页 |
| 3.3.5 PtTRI和PtTRII的组织表达模式分析 | 第30-31页 |
| 3.3.6 PtTRI和PtTRII的原核表达及功能验证 | 第31-34页 |
| 3.4 PtTRI和PtTRII重组蛋白的酶活力测定 | 第34-38页 |
| 3.4.1 PtTRI和PtTRII还原反应和氧化反应最适pH测定 | 第34页 |
| 3.4.2 PtTRI和PtTRII酶动力学反应体系 | 第34-35页 |
| 3.4.3 Western-blotting鉴定重组蛋白 | 第35-36页 |
| 3.4.4 PtTRI和PtTRII重组蛋白催化产物定性检测 | 第36-38页 |
| 第4章 结果与分析 | 第38-56页 |
| 4.1 PtTRI和PtTRII的克隆和分析 | 第38-39页 |
| 4.1.1 马尿泡根总RNA的获取以及RACE文库的构建 | 第38页 |
| 4.1.2 PtTRI的克隆 | 第38页 |
| 4.1.3 PtTRII的克隆 | 第38-39页 |
| 4.2 PtTRI和PtTRII的生物信息学分析 | 第39-43页 |
| 4.2.1 PtTRI和PtTRII核酸序列分析 | 第39-40页 |
| 4.2.2 PtTRI和PtTRII氨基酸序列多重比对 | 第40-42页 |
| 4.2.3 PtTRI和PtTRII系统发生树构建 | 第42页 |
| 4.2.4 PtTRI和PtTRII三维结构预测 | 第42-43页 |
| 4.3 PtTRI和PtTRII原核表达、分离纯化以及活性鉴定 | 第43-45页 |
| 4.3.1 PtTRI和PtTRII原核载体构建 | 第43页 |
| 4.3.2 PtTRI和PtTRII重组蛋白小量诱导 | 第43-44页 |
| 4.3.3 PtTRI和PtTRII重组蛋白质大量诱导及亲和纯化 | 第44-45页 |
| 4.4 PtTRI和PtTRII重组蛋白质活性鉴定 | 第45-54页 |
| 4.4.1 PtTRI重组蛋白质活性鉴定 | 第45-50页 |
| 4.4.2 PtTRII重组蛋白质活性鉴定 | 第50-54页 |
| 4.5 PtTRI和PtTRII组织表达谱分析 | 第54-56页 |
| 4.5.1 马尿泡RNA的提取 | 第54页 |
| 4.5.2 PtTRI和PtTRII组织表达模式分析 | 第54-56页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第56-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 研究生期间发表论文、参研项目 | 第66页 |
