| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词对照表 | 第10-12页 |
| 第一章 Krr1-Faf1复合物的功能研究 | 第12-52页 |
| 1.1 引言 | 第12-26页 |
| 1.1.1 真核生物的核糖体发生 | 第12-24页 |
| 1.1.1.1 RNA聚合酶Ⅰ介导的pre-rRNA的转录 | 第14-15页 |
| 1.1.1.2 pre-rRNA的剪切 | 第15-17页 |
| 1.1.1.3 pre-rRNA的修饰 | 第17-18页 |
| 1.1.1.4 pre-rRNA的剪接与折叠的协同作用 | 第18-19页 |
| 1.1.1.5 核糖体前体复合物的组装 | 第19-22页 |
| 1.1.1.6 核糖体大小亚基的出核转运 | 第22页 |
| 1.1.1.7 质量控制与监控 | 第22-24页 |
| 1.1.2 Krr1-Faf1复合物的背景介绍 | 第24-25页 |
| 1.1.3 本课题的研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 1.2 实验材料与方法 | 第26-38页 |
| 1.2.1 材料与试剂 | 第26-32页 |
| 1.2.1.1 仪器设备与耗材 | 第26-27页 |
| 1.2.1.2 实验试剂 | 第27-29页 |
| 1.2.1.3 菌株 | 第29页 |
| 1.2.1.4 引物与克隆载体 | 第29-32页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第32-38页 |
| 1.2.2.1 克隆载体构建 | 第32-33页 |
| 1.2.2.2 酵母转化 | 第33页 |
| 1.2.2.3 酵母穿梭菌株的构建 | 第33-34页 |
| 1.2.2.4 KM804/Krr1-6HA重组酵母菌株构建 | 第34页 |
| 1.2.2.5 酵母生长实验 | 第34页 |
| 1.2.2.6 细胞总蛋白提取及Western Blot实验 | 第34-35页 |
| 1.2.2.7 酵母细胞RNA的纯化 | 第35页 |
| 1.2.2.8 Northern Blot分析 | 第35-36页 |
| 1.2.2.9 密度梯度离心分析 | 第36-38页 |
| 1.3 实验结果与讨论 | 第38-52页 |
| 1.3.1 Krr1-Faf1复合物的结构分析 | 第38-41页 |
| 1.3.2 Krr1-Faf1复合物在小亚基加工过程中的功能分析 | 第41-50页 |
| 1.3.2.1 Krr1与Faf1的相互作用为酵母细胞生长所必需 | 第41-42页 |
| 1.3.2.2 Krr1-Faf1的相互作用为18S的早期加工所必需 | 第42-45页 |
| 1.3.2.3 Krr1与Faf1组装到核糖体前体中不依赖于其之间的相互作用 | 第45-48页 |
| 1.3.2.4 丧失Krr1结合能力的Faf1突变体无法从90S前体释放 | 第48-50页 |
| 1.3.3 讨论 | 第50-52页 |
| 第二章 去泛素化酶Otu2的结构与功能研究 | 第52-88页 |
| 2.1 引言 | 第52-60页 |
| 2.1.1 蛋白质泛素化调节 | 第52-54页 |
| 2.1.2 细胞内泛素的来源 | 第54-55页 |
| 2.1.3 细胞内去泛素化酶的作用及其与疾病的关系 | 第55-58页 |
| 2.1.4 泛素化调节在核糖体加工中的功能 | 第58-59页 |
| 2.1.5 Otu2蛋白的背景介绍 | 第59页 |
| 2.1.6 本课题的研究目的与意义 | 第59-60页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第60-70页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第60-64页 |
| 2.2.1.1 仪器设备与耗材 | 第60页 |
| 2.2.1.2 实验试剂 | 第60-62页 |
| 2.2.1.3 菌株 | 第62页 |
| 2.2.1.4 引物与克隆载体 | 第62-64页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第64-70页 |
| 2.2.2.1 克隆构建及蛋白质纯化 | 第64页 |
| 2.2.2.2 Otu2蛋白的晶体生长与结构解析 | 第64-65页 |
| 2.2.2.3 重组酵母菌株的构建 | 第65-66页 |
| 2.2.2.3 荧光成像 | 第66-67页 |
| 2.2.2.4 人IgG抗体与Epoxy Dynabeads的共价偶联 | 第67页 |
| 2.2.2.5 免疫共沉淀 | 第67-68页 |
| 2.2.2.6 一步TAP亲和纯化 | 第68-69页 |
| 2.2.2.7 抗体的制备与纯化 | 第69页 |
| 2.2.2.8 蔗糖密度梯度离心 | 第69-70页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第70-88页 |
| 2.3.1 Otu2蛋白对酵母实现最佳生长状态是必要的 | 第70-71页 |
| 2.3.2 Otu2对核糖体的最佳合成状态是必需的 | 第71-73页 |
| 2.3.3 Otu2蛋白质定位于细胞质中 | 第73页 |
| 2.3.4 Otu2与pre-40S组装因子体内存在相互作用 | 第73-79页 |
| 2.3.5 Otu2体外具有切割Ubi3释放成熟Rps31的能力 | 第79-80页 |
| 2.3.6 Otu2蛋白质核心催化结构域的表达与结晶 | 第80-83页 |
| 2.3.7 Otu2核心催化结构域的结构分析 | 第83-86页 |
| 2.3.8 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
