| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第13-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-30页 |
| 1.1 肝炎-心包积液综合征概述 | 第15-29页 |
| 1.1.1 流行病学特点 | 第15-16页 |
| 1.1.2 临床症状及病理变化 | 第16-17页 |
| 1.1.3 FAdV-4病原学特征 | 第17-18页 |
| 1.1.4 FAdV-4基因组 | 第18-19页 |
| 1.1.5 FAdV-4的主要结构蛋白 | 第19-21页 |
| 1.1.6 FAdV-4引起的免疫抑制 | 第21页 |
| 1.1.7 HHS诊断 | 第21-23页 |
| 1.1.8 HHS的防控及疫苗研究进展 | 第23-29页 |
| 1.2 火鸡疱疹病毒载体研究进展 | 第29页 |
| 1.3 LMH细胞系 | 第29-30页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 第3章 FADV-4感染LMH细胞的转录组学分析 | 第31-59页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 毒株及细胞 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第31页 |
| 3.1.3 相关试剂配制 | 第31-32页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.5 试验动物 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-39页 |
| 3.2.1 FAdV-4的增殖 | 第32页 |
| 3.2.2 病毒TCID50的测定 | 第32-33页 |
| 3.2.3 FAdV-4的一步法生长曲线测定 | 第33-34页 |
| 3.2.4 Trizol法提取细胞或组织总RNA | 第34页 |
| 3.2.5 用于转录组测序的FAdV-4感染试验设计 | 第34页 |
| 3.2.6 细胞总RNA的提取与纯化 | 第34页 |
| 3.2.7 测序文库的构建和测序 | 第34-35页 |
| 3.2.8 测序结果的生物信息学分析 | 第35页 |
| 3.2.9 实时荧光定量PCR | 第35-38页 |
| 3.2.10 FAdV-4感染鸡试验 | 第38页 |
| 3.2.11 siRNA的转染 | 第38-39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-55页 |
| 3.3.1 FAdV-4感染LMH细胞生长动力学 | 第39-40页 |
| 3.3.2 RNA样品质量检测 | 第40-41页 |
| 3.3.3 基因组比对结果 | 第41-42页 |
| 3.3.4 差异表达基因的筛选 | 第42-43页 |
| 3.3.5 转录组测序结果qRT-PCR验证 | 第43-44页 |
| 3.3.6 差异表达基因的聚类分析 | 第44-46页 |
| 3.3.7 差异基因的GO分析 | 第46-48页 |
| 3.3.8 差异基因的KEGG分析 | 第48-49页 |
| 3.3.9 与免疫和信号转导相关的重要信号通路分析 | 第49-51页 |
| 3.3.10 FAdV-4感染鸡肝脏差异表达基因荧光定量PCR检测 | 第51-53页 |
| 3.3.11 ELISA检测FAdV-4感染鸡血清中基因的表达 | 第53页 |
| 3.3.12 Toll样受体信号通路参与FAdV-4感染引起的炎症反应 | 第53-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-58页 |
| 3.4.1 FAdV-4感染后的天然免疫反应 | 第56-57页 |
| 3.4.2 FAdV-4感染后的炎症反应 | 第57-58页 |
| 3.4.3 FAdV-4感染过程中激活的其它信号通路 | 第58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 第4章 FADV-4重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗的构建 | 第59-105页 |
| 4.1 材料 | 第59-64页 |
| 4.1.1 质粒、菌株及毒株 | 第59-60页 |
| 4.1.2 试验用SPF鸡及细胞 | 第60页 |
| 4.1.3 引物 | 第60-61页 |
| 4.1.4 抗体 | 第61-62页 |
| 4.1.5 主要试剂 | 第62页 |
| 4.1.6 培养基及缓冲液配置 | 第62-64页 |
| 4.1.7 主要的仪器设备 | 第64页 |
| 4.2 方法 | 第64-76页 |
| 4.2.1 质粒DNA的抽提及纯化 | 第64-65页 |
| 4.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第65页 |
| 4.2.3 大肠杆菌的转化 | 第65页 |
| 4.2.4 鸡胚成纤维细胞的制备 | 第65-66页 |
| 4.2.5 脂质体介导的转染法 | 第66页 |
| 4.2.6 间接免疫荧光试验 | 第66-67页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE电泳 | 第67页 |
| 4.2.8 WesternBlot | 第67页 |
| 4.2.9 限制性酶切图谱分析 | 第67-68页 |
| 4.2.10 BAC化重组病毒的构建 | 第68页 |
| 4.2.11 HVT-BAC环状基因组电转化GS1783感受态细胞 | 第68-70页 |
| 4.2.12 BAC化重组病毒的拯救 | 第70页 |
| 4.2.13 Red/ET重组构建rHVT-Penton | 第70-73页 |
| 4.2.14 重组病毒体外生长特性的测定 | 第73-74页 |
| 4.2.15 FAdV-4的LD50测定 | 第74页 |
| 4.2.16 疫苗免疫 | 第74页 |
| 4.2.17 MDV攻毒试验 | 第74-75页 |
| 4.2.18 FAdV-4攻毒试验 | 第75-76页 |
| 4.3 结果与分析 | 第76-98页 |
| 4.3.1 HVT细菌人工染色体的构建 | 第76-84页 |
| 4.3.2 表达腺病毒五邻体Penton的HVT重组病毒的构建 | 第84-92页 |
| 4.3.3 rHVT-Penton对FAdV-4强毒攻毒保护效果 | 第92-97页 |
| 4.3.4 对MDV强毒株攻毒的免疫保护效果 | 第97-98页 |
| 4.4 讨论 | 第98-103页 |
| 4.4.1 HVT细菌人工染色体的构建和筛选 | 第100-101页 |
| 4.4.2 HVT插入位点和启动子的选择 | 第101-103页 |
| 4.4.3 重组病毒和亲本毒的免疫保护效果比较 | 第103页 |
| 4.5 小结 | 第103-105页 |
| 第5章 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简历 | 第116-117页 |
