| 中文摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-23页 |
| 1.西医对肺纤维化的认识 | 第15-17页 |
| 2.中医对肺纤维化的认识 | 第17-18页 |
| 3.美洲大蠊及其提取物的相关认识 | 第18-20页 |
| 4.康复新液治疗肺纤维化的假说 | 第20-21页 |
| 5.实验目的、内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 5.1 实验目的 | 第21页 |
| 5.2 实验内容 | 第21-22页 |
| 5.3 技术路线图 | 第22-23页 |
| 第一部分 康复新液对肺纤维化细胞模型的干预研究 | 第23-43页 |
| 材料与方法 | 第23-43页 |
| 1.实验材料 | 第23-27页 |
| 1.1 细胞系 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.3 主要设备和仪器 | 第24页 |
| 1.4 实验耗材 | 第24页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第24-26页 |
| 1.5.1 MEM培养基 | 第24-25页 |
| 1.5.2 PBS缓冲液 | 第25页 |
| 1.5.3 4%多聚甲醛 | 第25页 |
| 1.5.4 DEPC水配制 | 第25页 |
| 1.5.5 琼脂糖凝胶 | 第25-26页 |
| 1.5.6 细胞冻存液 | 第26页 |
| 1.6 Western-blot实验主要试剂配制 | 第26-27页 |
| 1.6.1 RIPA强裂解液配制 | 第26页 |
| 1.6.2 电泳缓冲液配制 | 第26页 |
| 1.6.3 上样缓冲液配制 | 第26页 |
| 1.6.4 转膜液配制 | 第26页 |
| 1.6.5 洗膜液配制 | 第26页 |
| 1.6.6 8%分离胶 | 第26-27页 |
| 1.6.7 5%浓缩胶 | 第27页 |
| 2.实验方法 | 第27-32页 |
| 2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第27页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第27-28页 |
| 2.1.3 细胞计数 | 第28页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第28页 |
| 2.1.5 细胞培养 | 第28页 |
| 2.2 细胞模型的建立 | 第28页 |
| 2.3 RNA样品的处理 | 第28-30页 |
| 2.3.1 提取MRC-5细胞RNA | 第28-29页 |
| 2.3.2 逆转录cDNA | 第29页 |
| 2.3.3 实时定量PCR | 第29-30页 |
| 2.4 CCK8法检测细胞毒性 | 第30页 |
| 2.5 康复新液干预 | 第30页 |
| 2.6 实验平台 | 第30页 |
| 2.7 统计学分析 | 第30-32页 |
| 3.结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 康复新液对MRC-5纤维化细胞模型干预后实验结果 | 第32-37页 |
| 3.1.1 TGF-β1诱导MRC-5纤维化细胞模型检测 | 第32-33页 |
| 3.1.2 康复新液对MRC-5细胞的细胞毒性 | 第33页 |
| 3.1.3 康复新液对TGF-β1诱导MRC-5纤维化细胞模型的干预后实时定量PCR检测结果 | 第33-35页 |
| 3.1.4 康复新液对TGF-β1诱导MRC-5纤维化细胞模型的干预后Western Blot检测结果 | 第35-37页 |
| 4.讨论 | 第37-43页 |
| 4.1 细胞模型的建立 | 第37页 |
| 4.2 纤维化指标α-SMA、LN、FN、CTGF、Collagen Ⅰ及Collagen Ⅲ的意义 | 第37-43页 |
| 第二部分 康复新液对肺纤维化大鼠模型的干预研究 | 第43-54页 |
| 材料与方法 | 第44-54页 |
| 1.实验材料 | 第44-45页 |
| 1.1 实验动物 | 第44页 |
| 1.2 主要药物及仪器 | 第44页 |
| 1.3 实验耗材 | 第44-45页 |
| 2.实验方法 | 第45-47页 |
| 2.1 动物分组 | 第45页 |
| 2.2 动物造模 | 第45页 |
| 2.3 动物给药 | 第45页 |
| 2.4 标本处理 | 第45-46页 |
| 2.5 肺组织HE染色 | 第46页 |
| 2.6 肺组织Masson染色 | 第46页 |
| 2.7 实时定量PCR方法 | 第46页 |
| 2.8 Western blot方法 | 第46-47页 |
| 2.9 实验平台 | 第47页 |
| 2.10 统计学分析 | 第47页 |
| 3.结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.1 康复新液对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型干预后实验结果 | 第47-51页 |
| 3.1.1 肺组织病理学观察 | 第47-48页 |
| 3.1.2 康复新液对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型干预后实时定量PCR检测结果 | 第48-49页 |
| 3.1.3 康复新液对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型干预后WesternBlot检测结果：图8A(条带图),图8B(灰度值) | 第49-51页 |
| 4.讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 肺纤维化动物模型的建立 | 第51-52页 |
| 4.2 康复新液剂量的选择依据 | 第52-54页 |
| 第三部分 康复新液对肺纤维化模型TGF-β1/Smad信号通路的MMPs/TIMPs调节机制研究 | 第54-78页 |
| 1.MMPs/TIMPs与ECM的关系 | 第54-56页 |
| 2.TGF-β1/Smad信号通路 | 第56-57页 |
| 材料与方法 | 第57-78页 |
| 1.实验材料 | 第57-58页 |
| 1.1 细胞系 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 1.3 主要设备和仪器 | 第57-58页 |
| 1.4 实验耗材 | 第58页 |
| 2.实验方法 | 第58-59页 |
| 2.1 实验方法 | 第58页 |
| 2.2 统计学分析 | 第58-59页 |
| 3.结果与分析 | 第59-69页 |
| 3.1 实时定量PCR检测结果 | 第59-64页 |
| 3.2 Western Blot检测结果 | 第64-69页 |
| 4.结论 | 第69-70页 |
| 5.讨论 | 第70-74页 |
| 5.1 实验结果讨论 | 第70-71页 |
| 5.2 关于PCR与WB结果不一致的讨论 | 第71-72页 |
| 5.3 阳新对照药地塞米松抗纤维化机制讨论 | 第72-73页 |
| 5.4 康复新液通利血脉而治络脉瘀阻 | 第73-74页 |
| 6.本实验不足 | 第74-76页 |
| 6.1 细胞实验中MRC-5细胞老化 | 第74页 |
| 6.2 样本量有限 | 第74-75页 |
| 6.3 实验结果的偏差 | 第75页 |
| 6.4 康复新液干预肺纤维化动物模型中缺乏浓度梯度探讨 | 第75页 |
| 6.5 信号通路选择太过单一 | 第75-76页 |
| 7.本实验创新点 | 第76-77页 |
| 7.1 首次验证康复新液治疗肺纤维化细胞模型的有效性 | 第76页 |
| 7.2 首次验证康复新液治疗肺纤维化动物模型的有效性 | 第76页 |
| 7.3 首次探索康复新液治疗肺纤维化模型的部分作用机制 | 第76-77页 |
| 8.展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-92页 |
| 综述 | 第92-103页 |
| 参考文献 | 第98-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附件一：在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 | 第104-105页 |
