| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 种公畜禽繁殖性能的生产学意义 | 第11页 |
| 2 精子的生命活力—代谢活动 | 第11-16页 |
| 2.1 精原干细胞 | 第11-12页 |
| 2.2 精子的发生(Spermatogenesis) | 第12页 |
| 2.3 精母细胞发生(Spermatocytogenesis) | 第12-13页 |
| 2.4 精子发生 | 第13-14页 |
| 2.5 睾丸支持细胞的作用 | 第14-15页 |
| 2.6 影响精子发生的因素 | 第15-16页 |
| 3 精液品质 | 第16页 |
| 4 弱精症 | 第16-17页 |
| 4.1 弱精症概述 | 第16-17页 |
| 4.2 弱精症相关基因的研究进展 | 第17页 |
| 5 RNA干扰技术 | 第17-19页 |
| 5.1 RNAi作用机制 | 第18页 |
| 5.2 siRNA的制备及转染方法 | 第18页 |
| 5.3 RNAi的技术应用 | 第18页 |
| 5.4 慢病毒载体 | 第18-19页 |
| 6 DGE(Digital Gene Expression Profile)数字基因表达谱 | 第19-21页 |
| 6.1 DGE简介 | 第19页 |
| 6.2 数字基因表达谱技术与基因芯片技术的比较 | 第19-20页 |
| 6.3 数字基因表达谱在研究中的应用 | 第20-21页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 公鸡弱精症相关候选基因的mRNA表达分析 | 第22-36页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1 实验动物 | 第22-23页 |
| 2.2 主要仪器 | 第23页 |
| 2.3 主要试剂 | 第23页 |
| 3 实验方法 | 第23-28页 |
| 3.1 生物信息学分析数字基因表达谱(DGE) | 第23-24页 |
| 3.2 精液品质检测 | 第24页 |
| 3.3 睾丸组织切片 | 第24页 |
| 3.4 睾丸总RNA提取(Trizol法提取总RNA) | 第24-25页 |
| 3.5 cDNA的合成及PCR反应 | 第25-26页 |
| 3.6 引物设计与合成 | 第26-27页 |
| 3.7 qPCR检测相关基因的表达 | 第27页 |
| 3.8 荧光定量数据处理与统计分析 | 第27-28页 |
| 4 试验结果 | 第28-33页 |
| 4.1 精液品质和鸡胚孵化率检测(弱精与正常个体的筛选)结果 | 第28页 |
| 4.2 数字基因表达谱DGE的分析筛选结果 | 第28-31页 |
| 4.3 睾丸组织切片观察与统计 | 第31-32页 |
| 4.4 总RNA完整性检测及目的基因的扩增 | 第32-33页 |
| 4.5 候选基因表达结果 | 第33页 |
| 5 讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 弱精相关候选基因CCNF及功能验证 | 第36-53页 |
| 1 引言 | 第36-37页 |
| 2 实验材料 | 第37-38页 |
| 2.1 实验动物 | 第37页 |
| 2.2 实验仪器 | 第37页 |
| 2.3 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.1 siRNAs的设计与合成 | 第38页 |
| 3.2 鸡SSCs的分离与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3 鸡睾丸支持细胞分离与鉴定 | 第39页 |
| 3.4 鸡DF1的培养 | 第39页 |
| 3.5 检测目的基因在SSCs、支持细胞和DF1中的表达量 | 第39页 |
| 3.6 siRNAs的转染 | 第39-40页 |
| 3.7 CCNF-siRNA特异序列的干扰效率的定量检测 | 第40页 |
| 3.8 靶向CCNF-siRNA特异序列转染及定量检测 | 第40页 |
| 3.9 CCK-8细胞增殖分析 | 第40-41页 |
| 4 实验结果 | 第41-50页 |
| 4.1 SSCs的分离和鉴定 | 第41-43页 |
| 4.2 支持细胞分离与鉴定 | 第43页 |
| 4.3 DF1细胞形态观察 | 第43-44页 |
| 4.4 检测目的基因在SSCs、支持细胞和DF1中的表达量 | 第44页 |
| 4.5 lentivirus-siRNA转染效率的检测 | 第44-45页 |
| 4.6 四条siRNA的干扰效率检测 | 第45-46页 |
| 4.7 siRNA靶向抑制CCNF的表达 | 第46-48页 |
| 4.8 CCK8检测细胞周期 | 第48-50页 |
| 5 讨论 | 第50-53页 |
| 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 发表学术论文目录 | 第62-63页 |
