摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
前言 | 第11-13页 |
1 材料、试剂和仪器 | 第13-19页 |
1.1 实验细胞株 | 第13页 |
1.2 试剂 | 第13-14页 |
1.3 仪器设备 | 第14-15页 |
1.4 试剂配制 | 第15-19页 |
1.4.1 DMEM细胞培养基 | 第15页 |
1.4.2 磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS) | 第15页 |
1.4.3 MTT工作液 | 第15页 |
1.4.4 胰酶储备液 | 第15页 |
1.4.5 胰酶工作液 | 第15页 |
1.4.6 多聚赖氨酸工作液(PLL) | 第15-16页 |
1.4.7 PMSF配制 | 第16页 |
1.4.8 考马斯亮蓝G250溶液 | 第16页 |
1.4.9 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 | 第16页 |
1.4.10 10×电泳缓冲液 | 第16页 |
1.4.11 1×转移缓冲液 | 第16页 |
1.4.12 10×丽春红染液 | 第16页 |
1.4.13 洗脱抗体缓冲液 | 第16-17页 |
1.4.14 10×TBS缓冲液 | 第17页 |
1.4.15 1×TBST缓冲液 | 第17页 |
1.4.16 封闭缓冲液(5%的脱脂奶粉) | 第17-19页 |
2 实验方法 | 第19-25页 |
2.1 PC12细胞培养 | 第19页 |
2.2 MTT比色法检测替诺福韦酯对PC12细胞存活率的影响 | 第19页 |
2.3 酶标法检测细胞培养液LDH的变化 | 第19页 |
2.4 Hoechst-33342染色观察细胞核形态的变化 | 第19-20页 |
2.5 TUNEL法检测细胞凋亡率 | 第20页 |
2.6 Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率 | 第20页 |
2.7 高内涵成像系统检测PC12细胞内ROS的含量 | 第20页 |
2.8 酶标法检测PC12细胞内丙二醛的含量 | 第20-21页 |
2.9 Western-blot检测PC12细胞Bax的表达 | 第21-23页 |
2.9.1 细胞总蛋白的提取 | 第21页 |
2.9.2 BCA试剂盒定量检测细胞总蛋白浓度 | 第21-22页 |
2.9.3 蛋白变性 | 第22页 |
2.9.4 Western-blot检测 | 第22-23页 |
2.10 统计学处理 | 第23-25页 |
3 实验结果 | 第25-33页 |
3.1 替诺福韦酯对PC12细胞增殖的影响 | 第25页 |
3.2 LDH法检测替诺福韦酯对PC12细胞的损伤作用 | 第25-26页 |
3.3 替诺福韦酯对PC12细胞核形态的影响 | 第26-27页 |
3.4 Tunel法观察替诺福韦酯对PC12细胞凋亡率的影响 | 第27-28页 |
3.5 Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测替诺福韦酯对PC12细胞凋亡的影响 | 第28-29页 |
3.6 PC12细胞内ROS含量测定 | 第29-30页 |
3.7 PC12细胞内丙二醛含量测定 | 第30页 |
3.8 替诺福韦酯对PC12细胞凋亡蛋白Bax表达的影响 | 第30-33页 |
4 讨论 | 第33-35页 |
5 结论 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-39页 |
文献综述 | 第39-49页 |
参考文献 | 第45-49页 |
附录 | 第49-51页 |
致谢 | 第51-53页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第53-54页 |