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钾离子通道FaTPK1基因在草莓果实成熟和品质形成中的功能研究

摘要第3-4页
Abstract第4页
缩略词第5-10页
第一章 引言第10-24页
    1.1 矿质元素对植物生长发育和抗病性的影响第10-13页
        1.1.1 矿质元素对植物生长的影响第10-11页
        1.1.2 矿质元素对果实发育成熟的影响第11页
        1.1.3 矿质营养与植物抗病性第11-13页
    1.2 钾在果实发育成熟及品质形成中的作用机理第13-14页
        1.2.1 钾在果实发育成熟中的作用机理第13页
        1.2.2 钾在果实品质形成中的作用机理第13-14页
    1.3 植物液泡在植物生长发育及果实成熟中的作用第14-15页
        1.3.1 植物液泡在植物生长发育中的作用第14页
        1.3.2 植物液泡在果实成熟中的作用第14-15页
    1.4 植物钾离子通道及转运体研究进展第15-19页
        1.4.1 Shaker家族钾离子通道第16页
        1.4.2 TPK家族和Kir-like家族第16-18页
        1.4.3 钾离子转运蛋白第18-19页
    1.5 蛋白外源表达第19-22页
        1.5.1 大肠杆菌表达系统第19-20页
        1.5.2 酵母表达系统第20页
        1.5.3 昆虫表达系统第20-21页
        1.5.4 哺乳动物表达系统第21页
        1.5.5 植物表达系统第21页
        1.5.6 无细胞表达体系第21-22页
    1.6 研究目的与意义第22-24页
第二章 材料与方法第24-46页
    2.1 试验材料第24页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 载体与菌株第24页
    2.2 试验试剂及配置第24-27页
        2.2.1 试验试剂第24页
        2.2.2 培养基的配制第24-25页
        2.2.3 溶液配置第25-27页
    2.3 试验仪器第27页
    2.4 试验方法第27-46页
        2.4.1 草莓RNA转录组测序第27页
        2.4.2 基因的克隆与序列测定及比对第27-29页
        2.4.3 半定量(SqRT-PCR)和荧光定量(qRT-PCR)分析基因表达量第29-31页
        2.4.4 果实圆片温育试验第31页
        2.4.5 瞬时表达载体的构建与转化试验第31-35页
        2.4.6 草莓果实瞬时侵染试验第35页
        2.4.7 蛋白的表达纯化及检测第35-41页
        2.4.8 等温滴定量热法(iTC)第41页
        2.4.9 洋葱表皮细胞亚细胞定位第41-42页
        2.4.10 矿质元素含量的测定第42页
        2.4.11 糖、花色苷及ABA含量的测定第42-43页
        2.4.12 草莓灰霉病原菌侵染试验第43页
        2.4.13 大肠杆菌突变菌株LB2003钾吸收试验第43-46页
第三章 结果与分析第46-64页
    3.1 草莓果实钾离子通道和运载体基因的转录组分析第46-48页
        3.1.1 钾离子通道(channel)和转运体(transporter)基因的转录分析第46-47页
        3.1.2 草莓FaTPK1的表达分析第47-48页
    3.2 '甜查理'草莓果实中FaTPK1的克隆、表达分析及亚细胞定位第48-51页
        3.2.1 FaTPK1的克隆及圆片温育试验第48-50页
        3.2.2 FaTPK1洋葱表皮亚细胞定位第50-51页
    3.3 FaTPK1在草莓果实发育和成熟过程中的功能分析第51-60页
        3.3.1 草莓7个果实发育时期矿质元素(7种)含量测定第51-52页
        3.3.2 草莓7个果实发育时期可溶性糖及花色苷含量的测定第52-53页
        3.3.3 FaTPK1基因的沉默与超表达第53-56页
        3.3.4 转基因草莓果实成熟相关基因表达分析第56-57页
        3.3.5 转基因草莓果实生理指标分析第57-58页
        3.3.6 转基因草莓果实对病原菌(Botrytis cinerea)敏感性检测第58-60页
    3.4 FaTPK1蛋白的表达纯化及功能研究第60-61页
        3.4.1 FaTPK1蛋白的表达纯化第60页
        3.4.2 FaTPK1蛋白活性测定第60-61页
    3.5 FaTPK1对大肠杆菌钾吸收突变菌株LB2003的钾吸收试验第61-63页
    3.6 FaTPK1基因的下调和过表达改变了ABA含量第63-64页
第四章 讨论第64-68页
    4.1 FaTPK1参与草莓果实成熟调控及品质形成第64-65页
    4.2 FaTPK1转基因草莓对病原真菌敏感性的分析第65页
    4.3 FaTPK1钾吸收能力分析第65-68页
第五章 结论第68-70页
参考文献第70-86页
致谢第86-88页
个人简历第88页

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