| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 BCCIP的结构和功能 | 第12-16页 |
| 1.1.1 BCCIP基因结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 BCCIP蛋白的生物学功能 | 第13-16页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3 四环素可诱导表达系统的应用 | 第17-19页 |
| 1.4 研究背景及研究计划 | 第19-20页 |
| 第2章 BCCIP蛋白表达纯化 | 第20-35页 |
| 2.1 材料与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试验试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要工具酶 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 pGEX-6p-1-BCCIP质粒的构建 | 第22-26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌中诱导表达GST-BCCIP重组蛋白 | 第26-28页 |
| 2.2.3 BCCIP抗体制备 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 pGEX-6P-1-BCCIP重组质粒构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 GST-BCCIPα、GST-BCCIPβ重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.3.3 GST-BCCIPα、GST-BCCIPβ重组蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.4 BCCIP抗体制备 | 第33-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 第3章 MCF-7Teton细胞系构建及验证 | 第35-49页 |
| 3.1 材料与设备 | 第35-37页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第35-36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第36-37页 |
| 3.1.4 细胞株 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第37-38页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第38-39页 |
| 3.2.3 确定G418筛选的最佳药物浓度 | 第39页 |
| 3.2.4 MCF-7Teton细胞系筛选 | 第39页 |
| 3.2.5 MCF-7Teton细胞系检测 | 第39-40页 |
| 3.2.6 基因组 DNA 提取（Biospin 细胞基因组 DNA 提取试剂盒） | 第40页 |
| 3.2.7 MCF-7BCCIPTeton细胞系筛选 | 第40-41页 |
| 3.2.8 细胞冻存及复苏 | 第41页 |
| 3.2.9 免疫印迹(WesternBlot)检测 | 第41-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 3.3.1 G418对MCF-7细胞的最适筛选浓度 | 第43页 |
| 3.3.2 puro对MCF-7细胞的最适筛选浓度 | 第43-44页 |
| 3.3.3 MCF-7细胞瞬转效率验证 | 第44-45页 |
| 3.3.4 Teton系统适用于MCF-7细胞 | 第45-46页 |
| 3.3.5 MCF-7Teton细胞系筛选验证 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 可诱导过表达BCCIP细胞系构建 | 第49-64页 |
| 4.1 材料与设备 | 第49-52页 |
| 4.1.1 质粒和菌株 | 第49-50页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第50-52页 |
| 4.1.4 主要抗体 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 pTRE2-puro-Myc-BCCIP质粒的构建 | 第52页 |
| 4.2.2 细胞冻存及复苏 | 第52页 |
| 4.2.3 确定puro筛选的最佳药物浓度 | 第52页 |
| 4.2.4 确定Dox最低有效浓度 | 第52-53页 |
| 4.2.5 确定Dox诱导表达的最适时间 | 第53页 |
| 4.2.6 免疫印迹(WesternBlot)检测 | 第53页 |
| 4.2.7 生长曲线的绘制 | 第53页 |
| 4.3 实验结果 | 第53-62页 |
| 4.3.1 pTRE2-puro-Myc-BCCIP重组质粒构建 | 第53-57页 |
| 4.3.2 MCF-7过表达BCCIP细胞系筛选验证 | 第57-59页 |
| 4.3.3 MCF-7BCCIPTeton细胞系检测 | 第59-60页 |
| 4.3.4 确定Dox最低有效浓度 | 第60页 |
| 4.3.5 确定Dox诱导表达的最适时间 | 第60-61页 |
| 4.3.6 过表达BCCIP抑制MCF-7细胞生长增殖 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 总结与展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
