| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-34页 |
| 1.1 严谨反应简介 | 第10-22页 |
| 1.1.1 严谨反应的定义 | 第10-11页 |
| 1.1.2 鸟苷四磷酸(ppGpp)的合成和水解 | 第11-12页 |
| 1.1.3 Re1A和SpoT蛋白不同结构域的功能 | 第12-15页 |
| 1.1.4 ppGpp的分布 | 第15-16页 |
| 1.1.5 ppGpp作用机制 | 第16-20页 |
| 1.1.6 ppGpp对细胞形态及生理状态的影响 | 第20-22页 |
| 1.2 鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞发育 | 第22-32页 |
| 1.2.1 蓝细菌简介 | 第22-23页 |
| 1.2.2 鱼腥蓝细菌PCC 7120异形胞发育调控机制 | 第23-32页 |
| 1.3 蓝细菌中ppGpp研究进展 | 第32页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-55页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第34-36页 |
| 2.2 培养基配方以及培养条件 | 第36-38页 |
| 2.3 常用贮存液和缓冲液配方 | 第38-40页 |
| 2.3.1 贮存液 | 第38-39页 |
| 2.3.2 缓冲液配方 | 第39-40页 |
| 2.4 主要的分子生物学试剂 | 第40页 |
| 2.5 实验方法 | 第40-55页 |
| 2.5.1 质粒DNA的制备及其基本操作 | 第40页 |
| 2.5.2 大肠杆菌转化 | 第40-41页 |
| 2.5.3 鱼腥蓝细菌PCC 7120总DNA的抽提 | 第41-43页 |
| 2.5.4 蓝细菌接合转移(三亲本杂交) | 第43-45页 |
| 2.5.5 接合转移转化子的验证 | 第45-46页 |
| 2.5.6 高效液相色谱法检测ppGpp | 第46页 |
| 2.5.7 藻青素测定 | 第46-47页 |
| 2.5.8 蛋白定量——BradFord法 | 第47-48页 |
| 2.5.9 蛋白质的诱导和纯化 | 第48-50页 |
| 2.5.10 包涵体的抽提纯化 | 第50页 |
| 2.5.11 抗体的制备 | 第50-51页 |
| 2.5.12 鱼腥蓝细菌PCC 7120细胞中蛋白质的制备 | 第51页 |
| 2.5.13 Western Blotting | 第51-52页 |
| 2.5.14 鱼腥蓝细菌PCC 7120的缺氮诱导 | 第52-53页 |
| 2.5.15 鱼腥蓝细菌PCC 7120 RNA的提取及纯化 | 第53-54页 |
| 2.5.16 反转录RNA及实时荧光定量反转录PCR(real-time PCR) | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-87页 |
| 3.1 鱼腥蓝细菌中Rel/SpoT同源蛋白的生物信息学分析结果 | 第55-57页 |
| 3.2 rel_(ana)互补大肠杆菌Rel/SpoT突变体 | 第57-59页 |
| 3.2.1 互补载体pGEX-6p-1549的构建 | 第57-58页 |
| 3.2.2 体内互补大肠杆菌突变体 | 第58-59页 |
| 3.3 rel_(ana)突变体的构建 | 第59-61页 |
| 3.3.1 中断失活突变体的构建 | 第59-60页 |
| 3.3.2 突变体MHRS的验证 | 第60-61页 |
| 3.4 互补菌株C1549的构建 | 第61-63页 |
| 3.4.1 互补质粒pRL25T-C1549的构建 | 第61-62页 |
| 3.4.2 互补菌株的筛选 | 第62页 |
| 3.4.3 互补菌株中rel_(ana)的表达检测 | 第62-63页 |
| 3.5 突变体MHRS的表型分析 | 第63-68页 |
| 3.5.1 rel_(ana)的突变影响了菌丝体在氮源缺乏条件下的生长 | 第63-65页 |
| 3.5.2 rel_(ana)的突变对细胞内色素含量的影响 | 第65-67页 |
| 3.5.3 rel_(ana)基因的中断影响了菌丝体对氨基酸饥饿的响应 | 第67-68页 |
| 3.6 缺氮条件下rel_(ana)基因在野生型鱼腥蓝细菌中的表达变化 | 第68-72页 |
| 3.6.1 real-time PCR检测rel_(ana)基因在野生型中的表达变化 | 第68-71页 |
| 3.6.2 rel_(ana)基因的转录融合菌株荧光观察结果 | 第71-72页 |
| 3.7 Rel_(ana)蛋白在鱼腥蓝细菌PCC 7120中的超表达 | 第72-76页 |
| 3.7.1 超表达质粒的构建 | 第72-75页 |
| 3.7.2 超表达菌株的表型 | 第75-76页 |
| 3.8 Rel_(ana)蛋白特异性地定位在营养细胞中 | 第76-81页 |
| 3.8.1 Rel_(ana)翻译融合菌株的构建 | 第76-78页 |
| 3.8.2 Rel_(ana)蛋白不同结构域缺失的翻译融合菌株的构建 | 第78-81页 |
| 3.9 rel_(ana)基因的突变影响了hetR基因的表达 | 第81-85页 |
| 3.9.1 突变体MHRS中hetR的表达变化 | 第82-83页 |
| 3.9.2 异位超表达HetR不能回复MHRS突变体异形胞的发育 | 第83-85页 |
| 3.10 rel_(ana)的突变影响了细胞的生存能力 | 第85-86页 |
| 3.11 rel_(ana)的突变影响了藻青素的积累 | 第86-87页 |
| 4 讨论与总结 | 第87-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 本文所用引物 | 第105-107页 |
| 发表的文章 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
