| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 缩略语 | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-16页 |
| 1 贻贝黏附蛋白 | 第11-13页 |
| 1.1 医用缝合方式发展史 | 第11-12页 |
| 1.2 贻贝黏附蛋白研究进展 | 第12-13页 |
| 2 遗传编码非天然氨基酸技术 | 第13-16页 |
| 第二章 实验内容及路线 | 第16-18页 |
| 1 实验内容 | 第16页 |
| 2 实验流程图 | 第16-17页 |
| 3 实验重点、难点 | 第17-18页 |
| 第三章 TK2库中L-Mimosine特异性合成酶的筛选 | 第18-36页 |
| 1 材料与试剂 | 第18-21页 |
| 1.1 材料 | 第18页 |
| 1.2 试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| 2 实验内容 | 第21-26页 |
| 2.1 L-Mimosine毒性验证 | 第21页 |
| 2.2 DH10B(pRep)电感受态的制备及转化效率的验证 | 第21-24页 |
| 2.3 TK2库中L-Mimosine特异性合成酶的筛选 | 第24-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-35页 |
| 3.1 L-Mimosine毒性验证 | 第26-27页 |
| 3.2 DH10B(pRep)电感受态转化效率验证 | 第27页 |
| 3.3 TK2库中L-Mimosine特异性合成酶的筛选 | 第27-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 正交氨酰tRNA合成酶突变库HJ1的构建 | 第36-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-37页 |
| 1.1 材料 | 第36页 |
| 1.2 试剂 | 第36-37页 |
| 2 实验内容 | 第37-43页 |
| 2.1 pBK-JYRS载体扩增 | 第37-38页 |
| 2.2 pBK片段化 | 第38-39页 |
| 2.3 RS饱和突变片段及扩增 | 第39-41页 |
| 2.4 构建重组载体 | 第41-42页 |
| 2.5 转化及突变库扩增 | 第42页 |
| 2.6 突变库的多样性检验 | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-47页 |
| 3.1 pBK-JYRS质粒双酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.2 PylRS饱和突变库HJ1的构建 | 第43-46页 |
| 3.3 HJ1实际库容鉴定及库扩增 | 第46-47页 |
| 3.4 HJ1突变库的多样性检验 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 HJ1库中Hepok特异性合成酶的筛选 | 第48-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第48-51页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.2 试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第49-51页 |
| 2 实验内容 | 第51-53页 |
| 2.1 HJ1库中Hepok特异性合成酶的筛选 | 第51页 |
| 2.2 sfGFP-HepoK蛋白制备及质谱鉴定 | 第51-53页 |
| 3 实验结果 | 第53-64页 |
| 3.1 HJ1库中Hepok特异性合成酶的筛选 | 第53-62页 |
| 3.2 sfGFP-HepoK蛋白SDS-PAGE电泳检测及质谱鉴定 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 第六章 重组Mfp3蛋白表达及粘性测试 | 第65-74页 |
| 1 材料与试剂 | 第65-66页 |
| 1.1 材料 | 第65页 |
| 1.2 试剂 | 第65页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第65-66页 |
| 2 实验内容 | 第66-68页 |
| 2.1 Mfp3重组载体的构建 | 第66-67页 |
| 2.2 Mfp3重组蛋白的表达、纯化及溶解度测试 | 第67页 |
| 2.3 SUMO-Mfp3的体外酶催化DOPA修饰 | 第67-68页 |
| 2.4 蛋白粘性测试 | 第68页 |
| 3 实验结果 | 第68-73页 |
| 3.1 Mfp3重组载体的构建 | 第68-70页 |
| 3.2 Mfp3重组蛋白的获得及溶解度测试 | 第70-72页 |
| 3.3 SUMO-Mfp3的体外酶催化DOPA修饰 | 第72-73页 |
| 3.4 蛋白粘性测试 | 第73页 |
| 4 讨论 | 第73-74页 |
| 第七章 HJ1库中L-Mimosine特异性正交翻译系统的筛选 | 第74-87页 |
| 1 实验内容 | 第74页 |
| 2 实验结果 | 第74-85页 |
| 2.1 一轮正向筛选(1~(st)PositiveSelection) | 第74页 |
| 2.2 一轮单克隆化(1~(st)MonocloneCulturing) | 第74-75页 |
| 2.3 二轮正向筛选(2~(nd)PositiveSelection) | 第75-76页 |
| 2.4 二轮单克隆化(2~(nd)MonocloneCulturing) | 第76-78页 |
| 2.5 三轮正向筛选(3~(rd)PositiveSelection) | 第78-80页 |
| 2.6 三轮单克隆化(3~(rd)MonocloneCulturing) | 第80-82页 |
| 2.7 四轮正向筛选(4~(th)PositiveSelection) | 第82-83页 |
| 2.8 四轮单克隆化(4~(th)MonocloneCulturing) | 第83-85页 |
| 2.9 与pTAK-GFP-182TAG-C-His共转验证 | 第85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
