| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 CRISP 蛋白结构要点 | 第9-11页 |
| 1.2 哺乳动物中 CRISP 的生物学功能 | 第11-14页 |
| 1.2.1 CRISP-1 | 第11-12页 |
| 1.2.2 CRISP-2 | 第12页 |
| 1.2.3 CRISP-3 | 第12-13页 |
| 1.2.4 CRISP-4 | 第13-14页 |
| 1.3 无脊椎及低等脊椎动物 CRISP 的生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.3.1 蛇毒 CRISP 蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.2 Helothermine | 第15-16页 |
| 1.3.3 Allurin | 第16页 |
| 1.3.4 CRBGP | 第16页 |
| 1.3.5 Tex31 | 第16-17页 |
| 1.4 应用展望 | 第17-18页 |
| 2 七鳃鳗富含半胱氨酸分泌蛋白基因的分子克隆及生物信息学分析 | 第18-35页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第19页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取 | 第19页 |
| 2.2.3 基因组 DNA 的去除 | 第19-20页 |
| 2.2.4 cDNA 第一链的合成 | 第20-21页 |
| 2.2.5 七鳃鳗 CRBGP 基因的扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.6 七鳃鳗 CRBGP 基因的回收 | 第22页 |
| 2.2.7 目的片段与 T 载体的连接和转化 | 第22页 |
| 2.2.8 阳性菌落的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.9 pMD-19T-L-CRBGP 质粒的提取以及测序鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.10 大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-26页 |
| 2.3.1 七鳃鳗口腔腺总 RNA 的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 七鳃鳗 CRBGP 基因的克隆 | 第25-26页 |
| 2.4 七鳃鳗 CRBGP 基因编码氨基酸序列生物信息学分析 | 第26-33页 |
| 2.4.1 分析七鳃鳗 CRBGP 基因的所有在线网站和软件 | 第26-27页 |
| 2.4.2 结果 | 第27-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 小结 | 第34-35页 |
| 3 七鳃鳗 L-CRBGP 基因的重组表达与蛋白纯化 | 第35-52页 |
| 3.1 实时荧光定量 PCR 法检测 L-CRBGP 在各组织中的表达 | 第35-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.2 方法 | 第35-37页 |
| 3.1.3 结果 | 第37-38页 |
| 3.2 七鳃鳗 L-CRBGP 基因的原核表达及重组蛋白的纯化 | 第38-48页 |
| 3.2.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.2.2 方法 | 第39-44页 |
| 3.2.3 结果 | 第44-48页 |
| 3.3 七鳃鳗口腔腺天然 CRBGP 的分离纯化 | 第48-50页 |
| 3.3.1 材料 | 第48页 |
| 3.3.2 方法 | 第48页 |
| 3.3.3 结果 | 第48-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 4 七鳃鳗天然 CRBGP 及 rL-CRBGP 体外抗氧化活性分析 | 第52-57页 |
| 4.1 材料 | 第52页 |
| 4.2 方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 总还原力的测定 | 第52-53页 |
| 4.2.2 羟自由基清除能力的测定 | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-55页 |
| 4.3.1 天然 CRBGP 与 rL-CRBGP 还原力的比较 | 第53-54页 |
| 4.3.2 天然 CRBGP 与 rL-CRBGP 蛋白羟自由基清除能力的比较 | 第54-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-56页 |
| 4.5 小结 | 第56-57页 |
| 5 七鳃鳗 CRBGP 蛋白抗血管新生活性初步探索 | 第57-74页 |
| 5.1 材料 | 第57页 |
| 5.2 方法 | 第57-61页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第57页 |
| 5.2.2 细胞增殖实验 | 第57-58页 |
| 5.2.3 细胞迁移实验 | 第58-59页 |
| 5.2.4 细胞侵袭实验 | 第59页 |
| 5.2.5 细胞凋亡实验 | 第59-61页 |
| 5.2.6 血管生成的体内实验 | 第61页 |
| 5.3 结果 | 第61-72页 |
| 5.3.1 七鳃鳗天然 CRBGP 和 rL-CRBGP 蛋白抑制由 bFGF 诱导的 HUVEC 和Hela 细胞的增殖 | 第61-63页 |
| 5.3.2 七鳃鳗天然 CRBGP 抑制 HUVEC 和 Hela 细胞的迁移 | 第63-66页 |
| 5.3.3 七鳃鳗天然 CRBGP 抑制 HUVEC 和 Hela 细胞的侵袭 | 第66-68页 |
| 5.3.4 七鳃鳗天然 CRBGP 诱导 Hela 细胞凋亡 | 第68-71页 |
| 5.3.5 七鳃鳗天然 CRBGP 对由 bFGF 诱导的鸡绒毛尿囊膜血管新生的抑制作用 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-73页 |
| 5.5 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 本论文的创新点 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 附录A 不同物种的 CRISP 的 FASTA 格式氨基酸序列 | 第80-83页 |
| 附录B 表达载体 pEGX-4T-1 质粒图谱 | 第83-84页 |
| 附录C SDS-PAGE 凝胶电泳配方 | 第84-85页 |
| 附录D 蛋白质浓度测定标准曲线 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
