| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 鱼类免疫研究 | 第10-13页 |
| 1.2 IKKε与天然免疫 | 第13-20页 |
| 1.2.1 NF-κB与IκB | 第13-14页 |
| 1.2.2 IKKε的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.3 青鱼、草鱼及多倍体鱼 | 第20-23页 |
| 1.3.1 青鱼和草鱼 | 第20-21页 |
| 1.3.2 多倍体 | 第21-23页 |
| 第二章 青鱼草鱼以及多倍体鱼IKKε基因的克隆 | 第23-46页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 青鱼IKKε基因cDNA编码阅读框的克隆 | 第24-29页 |
| 2.2.1 青鱼脾脏以及多倍体鱼细胞RNA的提取—Trizol法 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第25页 |
| 2.2.3 引物设计及合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| 2.2.6 PCR产物的回收 | 第27页 |
| 2.2.7 PCR回收产物平滑末端加A尾 | 第27页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第27页 |
| 2.2.9 采用热激法转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.10 阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.11 测序鉴定 | 第29页 |
| 2.3 青鱼IKKE基因cDNA全长的扩增 | 第29-38页 |
| 2.3.1 多倍体鱼细胞以及青鱼草鱼脾脏RNA的提取—Trizol法 | 第29页 |
| 2.3.2 多倍体鱼细胞以及青鱼脾脏cDNA的制备 | 第29-32页 |
| 2.3.3 5’RACE的PCR扩增 | 第32-34页 |
| 2.3.4 3’RACE的PCR扩增 | 第34-38页 |
| 2.4 实验结果 | 第38-45页 |
| 2.4.1 总RNA提取结果 | 第38页 |
| 2.4.2 青鱼草鱼IKKε基因cDNA序列信息 | 第38-44页 |
| 2.4.3 青鱼草鱼IKKε基因的进化树分析 | 第44-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 青鱼IKKε基因的表达 | 第46-62页 |
| 3.1 材料 | 第46-48页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第46页 |
| 3.1.2 仪器,试剂与配置 | 第46-48页 |
| 3.2 方法 | 第48-57页 |
| 3.2.1 免疫印记检测(western blotting) | 第48-50页 |
| 3.2.2 免疫共聚焦(confocal) | 第50-52页 |
| 3.2.3 青鱼IKKε基因开放阅读框的克隆 | 第52页 |
| 3.2.4 构建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk与pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表达载体 | 第52-55页 |
| 3.2.5 青鱼IKKε基因在HEK293T细胞中的表达 | 第55页 |
| 3.2.6 青鱼IKKε基因构建慢病毒载体 | 第55-57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-60页 |
| 3.3.1 构建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk与pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表达载体 | 第57-58页 |
| 3.3.2 青鱼IKKε基因在HEK293T细胞中的表达 | 第58-59页 |
| 3.3.3 青鱼IKKε基因的免疫荧光 | 第59页 |
| 3.3.4 构建青鱼IKKε基因的慢病毒载体 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
