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shRNA沉默肾癌786-0和OS-RC-2细胞株中HIF-2α的表达对VEGF的影响

中文摘要第3-5页
Abstract第5-6页
英文縮写表第7-8页
技术路线第8-13页
前言第13-14页
第一章 实验材料第14-19页
    1.1 临床标本第14页
    1.2 主要试剂第14页
    1.3 菌种、质粒、细胞株第14-15页
    1.4 主要仪器第15-16页
    1.5 试剂配制方法第16-19页
        1.5.1 免疫组织化学试剂配制第16页
        1.5.2 质粒构建试剂的配制第16-17页
        1.5.3 细胞培养试剂配制第17-19页
第二章 实验方法第19-26页
    2.1 HIF-2α和VEGF蛋白在肾癌和癌旁组织中的表达第19-20页
        2.1.1 制备蜡块第19页
        2.1.2 蜡块切片第19页
        2.1.3 免疫组化染色PV9001二步法步骤第19页
        2.1.4 结果判断第19-20页
        2.1.5 统计学方法第20页
    2.2 HIF-2α shRNA重组质粒的构建第20-22页
        2.2.1 沉默序列设计第20页
        2.2.2 序列合成第20-21页
        2.2.3 制备感受态细菌第21页
        2.2.4 转化感受态第21-22页
        2.2.5 重组质粒的筛选及提取第22页
        2.2.6 DNA序列测定第22页
    2.3 shRNA重组质粒对786-0和OS-RC-2细胞中HIF-2 α和VEGF的作用第22-26页
        2.3.1 细胞培养第22-23页
        2.3.2 细胞转染第23页
        2.3.3 细胞形态学观察第23页
        2.3.4 细胞总RNA的提取第23-24页
        2.3.5 cDNA合成第24页
        2.3.6 引物设计第24页
        2.3.7 PCR反应第24-25页
        2.3.8 数据分析设置第25页
        2.3.9 流式细胞仪分析细胞凋亡第25页
        2.3.10 统计学分析第25-26页
第三章 实验结果第26-35页
    3.1 HIF-2α和VEGF在肾癌及癌旁组织中的表达及意义第26-27页
        3.1.1 HIF-2α蛋白的表达第26-27页
        3.1.2 HIF-2α和VEGF在RCC中的表达相关性第27页
    3.2 shRNA沉默肾透明细胞癌细胞株786-0和OS-RC-2中HIF-2α基因表达对VEGF蛋白的表达影响第27-35页
        3.2.1 shRNA重组质粒的鉴定第27页
        3.2.2 转染后细胞的镜下观察第27-29页
        3.2.3 shRNA重组质粒的筛选第29页
        3.2.4 shRNA重组质粒对HIF-2α mRNA表达的影响第29-31页
        3.2.5 shRNA重组质粒对两种细胞早期凋亡的影响第31-33页
        3.2.6 shRNA重组质粒对细胞VEGF蛋白表达的影响第33-35页
第四章 结论第35-41页
    4.1 主要结论第35页
    4.2 讨论第35-41页
参考文献第41-46页
综述第46-53页
    参考文献第51-53页
在学期间的研究成果第53-54页
致谢第54页

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