| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文縮写表 | 第7-8页 |
| 技术路线 | 第8-13页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 第一章 实验材料 | 第14-19页 |
| 1.1 临床标本 | 第14页 |
| 1.2 主要试剂 | 第14页 |
| 1.3 菌种、质粒、细胞株 | 第14-15页 |
| 1.4 主要仪器 | 第15-16页 |
| 1.5 试剂配制方法 | 第16-19页 |
| 1.5.1 免疫组织化学试剂配制 | 第16页 |
| 1.5.2 质粒构建试剂的配制 | 第16-17页 |
| 1.5.3 细胞培养试剂配制 | 第17-19页 |
| 第二章 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.1 HIF-2α和VEGF蛋白在肾癌和癌旁组织中的表达 | 第19-20页 |
| 2.1.1 制备蜡块 | 第19页 |
| 2.1.2 蜡块切片 | 第19页 |
| 2.1.3 免疫组化染色PV9001二步法步骤 | 第19页 |
| 2.1.4 结果判断 | 第19-20页 |
| 2.1.5 统计学方法 | 第20页 |
| 2.2 HIF-2α shRNA重组质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.1 沉默序列设计 | 第20页 |
| 2.2.2 序列合成 | 第20-21页 |
| 2.2.3 制备感受态细菌 | 第21页 |
| 2.2.4 转化感受态 | 第21-22页 |
| 2.2.5 重组质粒的筛选及提取 | 第22页 |
| 2.2.6 DNA序列测定 | 第22页 |
| 2.3 shRNA重组质粒对786-0和OS-RC-2细胞中HIF-2 α和VEGF的作用 | 第22-26页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第23页 |
| 2.3.3 细胞形态学观察 | 第23页 |
| 2.3.4 细胞总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.5 cDNA合成 | 第24页 |
| 2.3.6 引物设计 | 第24页 |
| 2.3.7 PCR反应 | 第24-25页 |
| 2.3.8 数据分析设置 | 第25页 |
| 2.3.9 流式细胞仪分析细胞凋亡 | 第25页 |
| 2.3.10 统计学分析 | 第25-26页 |
| 第三章 实验结果 | 第26-35页 |
| 3.1 HIF-2α和VEGF在肾癌及癌旁组织中的表达及意义 | 第26-27页 |
| 3.1.1 HIF-2α蛋白的表达 | 第26-27页 |
| 3.1.2 HIF-2α和VEGF在RCC中的表达相关性 | 第27页 |
| 3.2 shRNA沉默肾透明细胞癌细胞株786-0和OS-RC-2中HIF-2α基因表达对VEGF蛋白的表达影响 | 第27-35页 |
| 3.2.1 shRNA重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 3.2.2 转染后细胞的镜下观察 | 第27-29页 |
| 3.2.3 shRNA重组质粒的筛选 | 第29页 |
| 3.2.4 shRNA重组质粒对HIF-2α mRNA表达的影响 | 第29-31页 |
| 3.2.5 shRNA重组质粒对两种细胞早期凋亡的影响 | 第31-33页 |
| 3.2.6 shRNA重组质粒对细胞VEGF蛋白表达的影响 | 第33-35页 |
| 第四章 结论 | 第35-41页 |
| 4.1 主要结论 | 第35页 |
| 4.2 讨论 | 第35-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 综述 | 第46-53页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 在学期间的研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
