| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-36页 |
| 1.1 果蝇血液发育简介 | 第10-15页 |
| 1.1.1 果蝇血细胞生成的起点——胚胎头部中胚层 | 第11页 |
| 1.1.2 淋巴岛——果蝇幼虫期的造血器官 | 第11-12页 |
| 1.1.3 果蝇血细胞结构和功能特征 | 第12-15页 |
| 1.2 影响血细胞发育的基因及信号途径 | 第15-22页 |
| 1.2.1 影响血细胞发育的关键基因 | 第15-16页 |
| 1.2.2 影响血细胞生成的信号途径 | 第16-22页 |
| 1.3 果蝇相关技术简介 | 第22-36页 |
| 1.3.1 利用P转座子插入突变法建立果蝇突变系 | 第22-28页 |
| 1.3.2 利用UAS/GAL4异位表达系统研究果蝇基因的功能 | 第28-30页 |
| 1.3.3 利用RNA干扰技术研究果蝇基因的功能 | 第30-34页 |
| 1.3.4 转基因果蝇模型的建立 | 第34-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第36页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第38页 |
| 2.1.5 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第38-39页 |
| 2.1.6 果蝇品系 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-56页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第40页 |
| 2.2.2 反转录 | 第40页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第41-42页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.6 PCR产物与T-载体的连接 | 第42-43页 |
| 2.2.7 转化(热休克法) | 第43页 |
| 2.2.8 质粒的小量制备 | 第43-44页 |
| 2.2.9 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第44页 |
| 2.2.10 测序 | 第44页 |
| 2.2.11 多克隆抗体制备技术 | 第44-46页 |
| 2.2.12 Western-blot技术 | 第46-47页 |
| 2.2.13 果蝇胚胎抗体染色 | 第47-48页 |
| 2.2.14 果蝇胚胎原位杂交 | 第48-51页 |
| 2.2.15 转基因果蝇的制备 | 第51-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-73页 |
| 3.1 TRIM45果蝇同源基因CG8419的生物信息学分析及克隆 | 第56-59页 |
| 3.1.1 果蝇CG8419基因的生物信息学分析 | 第56-58页 |
| 3.1.2 果蝇CG8419基因的克隆 | 第58-59页 |
| 3.2 CG8419基因在果蝇胚胎期的表达模式 | 第59-61页 |
| 3.2.1 胚胎原位杂交 | 第59-61页 |
| 3.2.2 胚胎抗体染色 | 第61页 |
| 3.3 CG8419敲除品系的构建及各品系的Western blotting检测 | 第61-63页 |
| 3.3.1 CG8419基因P因子敲除品系的构建 | 第61-62页 |
| 3.3.2 CG8419各品系的Western blotting检测 | 第62-63页 |
| 3.4 CG8419各品系成熟血细胞表型观察 | 第63-65页 |
| 3.4.1 CG8419各品系含晶细胞的表型观察 | 第63-64页 |
| 3.4.2 CG8419各品系血细胞总数的表型观察 | 第64-65页 |
| 3.5 利用RNAi技术研究CG8419的功能 | 第65-66页 |
| 3.6 CG8419各品系血液标记基因的mRNA和蛋白表达水平分析 | 第66-70页 |
| 3.6.1 RT-PCR分析血液标记基因的表达水平 | 第66-67页 |
| 3.6.2 Srp多克隆抗体的制备及各突变品系Srp蛋白表达水平 | 第67-70页 |
| 3.7 CG8419转基因果蝇品系的建立 | 第70-73页 |
| 3.7.1 pUAST-CG8419转基因质粒的构建 | 第70-71页 |
| 3.7.2 果蝇显微注射结果及平衡定位 | 第71-73页 |
| 4 结论 | 第73-74页 |
| 5 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-88页 |
| 附录1 | 第88-89页 |
| 附录2 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
