| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 文献回顾 | 第17-28页 |
| 实验一 Nob1 在出生后大鼠耳蜗发育中的表达 | 第28-41页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| 1.1 实验动物 | 第28页 |
| 1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-35页 |
| 2.1 标本取材 | 第30页 |
| 2.2 免疫荧光染色 | 第30-31页 |
| 2.3 Real-time PCR 方法 | 第31-34页 |
| 2.4 Western-Blot 方法 | 第34页 |
| 2.5 统计学分析 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-39页 |
| 3.1 大鼠出生后耳蜗的形态发育 | 第35-36页 |
| 3.2 Nob1 在出生后大鼠耳蜗发育中的表达 | 第36-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 实验二 Nob1 shRNA 慢病毒干扰载体及重组 5 型腺病毒过表达载体构建与鉴定 | 第41-58页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| 1.1 质粒构建、宿主菌、实验细胞 | 第41-42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-50页 |
| 2.1 Nob1 shRNA 慢病毒干扰载体构建及鉴定 | 第43-47页 |
| 2.2 Nob1 重组 5 型腺病毒过表达载体构建与鉴定 | 第47-50页 |
| 3 结果 | 第50-56页 |
| 3.1 Nob1 shRNA 慢病毒表达载体的构建与鉴定 | 第50-54页 |
| 3.2 Nob1 重组 5 型腺病毒过表达载体构建与鉴定 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 实验三 HK-2 细胞系中观察 Nob1 与细胞凋亡的关系 | 第58-70页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 细胞株与病毒载体 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 1.3 主要实验器材及仪器 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| 2.1 细胞培养 | 第59-60页 |
| 2.2 免疫细胞荧光染色检测 HK-2 细胞中 Nob1 蛋白表达 | 第60页 |
| 2.3 慢病毒感染 HK-2 细胞并确定转染效率 | 第60-61页 |
| 2.4 重组 5 型腺病毒转染 HK-2 细胞并确定转染效率 | 第61页 |
| 2.5 细胞实验及分组 | 第61-62页 |
| 2.6 Western-Blot 检测过表达及干扰后 Nob1 蛋白表达情况 | 第62页 |
| 2.7 流式细胞仪进行细胞凋亡检测 | 第62页 |
| 2.8 统计学分析 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-68页 |
| 3.1 HK-2 细胞培养情况 | 第62页 |
| 3.2 HK-2 细胞中 Nob1 蛋白表达情况 | 第62-63页 |
| 3.3 慢病毒转染 HK-2 细胞 | 第63-64页 |
| 3.4 重组腺病毒转染 HK-2 细胞 | 第64-66页 |
| 3.5 Western-Blot 检测过表达及干扰后 Nob1 蛋白表达情况 | 第66页 |
| 3.6 流式细胞仪进行细胞凋亡检测结果 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 实验四 离体耳蜗器官培养模型的建立 | 第70-76页 |
| 1 材料 | 第70-71页 |
| 1.1 实验动物 | 第70页 |
| 1.2 主要试剂 | 第70-71页 |
| 1.3 主要实验器材及仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-73页 |
| 2.1 离体耳蜗器官组织分离培养 | 第71-72页 |
| 2.2 耳蜗毛细胞染色观察 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-74页 |
| 3.1 耳蜗器官组织体外培养情况 | 第73页 |
| 3.2 不同时间点耳蜗 corti 器体外培养情况观测 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 实验五 Nob1 在体外培养耳蜗毛细胞顺铂损伤模型中的表达及转基因实验 | 第76-85页 |
| 1 材料 | 第76-77页 |
| 1.1 实验动物 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂 | 第76-77页 |
| 1.3 主要实验器材及仪器 | 第77页 |
| 2 方法 | 第77-79页 |
| 2.1 耳蜗 Corti 器分离培养 | 第77页 |
| 2.2 顺铂对体外培养 Corti 器的损伤模型中 Nob1 的表达 | 第77-78页 |
| 2.3 慢病毒干扰载体转染体外培养 Corti 器 | 第78页 |
| 2.4 统计学分析 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-82页 |
| 3.1 顺铂导致体外培养 Corti 器中毛细胞损伤 | 第79-81页 |
| 3.2 顺铂对体外培养 Corti 器的损伤模型中 Nob1 的表达 | 第81-82页 |
| 3.3 慢病毒载体转染体外培养 Corti 器 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-85页 |
| 实验六 应用 RNA 干扰下调 Nob1 基因后对顺铂所致大鼠听力及耳蜗毛细胞的损伤的拮抗作用 | 第85-98页 |
| 1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1 实验动物 | 第85页 |
| 1.2 主要试剂 | 第85-86页 |
| 1.3 主要仪器 | 第86页 |
| 2 方法 | 第86-89页 |
| 2.1 慢病毒空载体耳蜗内显微注射观察病毒颗粒分布及评估手术创伤 | 第86-88页 |
| 2.2 观察应用 RNA 干扰下调 Nob1 基因后对顺铂所致大鼠听力及耳蜗毛细胞的损伤的作用 | 第88-89页 |
| 2.3 统计学分析 | 第89页 |
| 3 结果 | 第89-95页 |
| 3.1 显微注射后实验动物一般情况 | 第89页 |
| 3.2 慢病毒分布及转染情况 | 第89-91页 |
| 3.3 手术损伤比较 | 第91-92页 |
| 3.4 大鼠耳蜗中 Nob1 慢病毒干扰效果验证 | 第92页 |
| 3.5 Nob1 shRNA 慢病毒显微注射后对顺铂所致大鼠听力及耳蜗毛细胞的损伤的拮抗作用 | 第92-95页 |
| 4 讨论 | 第95-98页 |
| 小结 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-110页 |
| 附录 | 第110-111页 |
| 个人简历和研究成果 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
