| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 核糖体简介 | 第10页 |
| 1.2 核糖体的质量控制机制 | 第10-11页 |
| 1.3 蓝细菌及其模式生物rRNA操纵子的数目和转录方向 | 第11-12页 |
| 1.4 rRNA在蛋白合成中的作用 | 第12页 |
| 1.5 原核生物rRNA的转录加工 | 第12-13页 |
| 1.6 细菌中23S rRNA剪切现象 | 第13-18页 |
| 1.6.1 Salmonella中23S rRNA剪切现象研究 | 第15页 |
| 1.6.2 Rhizobium中23S rRNA剪切现象研究 | 第15页 |
| 1.6.3 Rhodobacter中23S rRNA剪切现象研究 | 第15-16页 |
| 1.6.4 Anacystis nidulans中23S rRNA剪切现象研究 | 第16页 |
| 1.6.5 高等植物叶绿体中23S rRNA剪切现象研究 | 第16-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-30页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.2 常用试剂配方 | 第18-19页 |
| 2.3 培养基配方以及培养条件 | 第19-21页 |
| 2.4 主要分子生物学试剂 | 第21页 |
| 2.5 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.5.1 热酚法抽提RNA | 第21-22页 |
| 2.5.2 FAM荧光探针的设计及杂交 | 第22-23页 |
| 2.5.3 23S rRNA剪切位点的克隆原理及方法 | 第23-26页 |
| 2.5.3.1 RNA环化 | 第23-24页 |
| 2.5.3.2 环化RNA分子的反转录及巢式扩增 | 第24-26页 |
| 2.5.4 蔗糖密度梯度分离核糖体 | 第26-27页 |
| 2.5.4.1 菌体培养 | 第26页 |
| 2.5.4.2 菌体收集 | 第26页 |
| 2.5.4.3 沉淀核糖体 | 第26页 |
| 2.5.4.4 蔗糖梯度制备 | 第26页 |
| 2.5.4.5 超速离心分离核糖体 | 第26-27页 |
| 2.5.5 体外转录RNA | 第27页 |
| 2.5.5.1 体外转录E.coli 9S rRNA | 第27页 |
| 2.5.5.2 切点附近序列Fg1的体外转录 | 第27页 |
| 2.5.6 酶活测定 | 第27-28页 |
| 2.5.7 蛋白质的诱导表达、纯化及定量 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-45页 |
| 3.1 不同物种中RNA抽提条带比较 | 第30-31页 |
| 3.2 荧光探针杂交确定条带来源 | 第31-32页 |
| 3.3 23S rRNA剪切位点的克隆 | 第32-34页 |
| 3.3.1 RNA酶连后检测rRNA分子完整性 | 第32-33页 |
| 3.3.2 23S rRNA剪切位点的克隆结果 | 第33-34页 |
| 3.4 蔗糖密度梯度分离核糖体 | 第34-36页 |
| 3.5 寻找参与剪切作用的酶 | 第36-43页 |
| 3.5.1 Alr4331确实有RNase E活性 | 第37-38页 |
| 3.5.2 RNase E、RNase J对体外转录的切点附近序列剪切作用 | 第38-43页 |
| 3.6 小结 | 第43-45页 |
| 4 讨论和展望 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录1 引物及探针总表 | 第53-55页 |
| 附录2 切点克隆测序结果总结 | 第55-57页 |
