| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 前言 | 第10-21页 |
| 1 材料与方法 | 第21-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 试验试剂 | 第21页 |
| 1.1.2 培养基与缓冲液 | 第21-22页 |
| 1.2 cDNA文库构建 | 第22-26页 |
| 1.2.1 膜荚黄芪总RNA的提取 | 第22页 |
| 1.2.2 cDNA第一链合成 | 第22-23页 |
| 1.2.3 Primer Extension合成ds cDNA | 第23页 |
| 1.2.4 ds cDNA的纯化和大小片段的分级分离 | 第23页 |
| 1.2.5 cDNA与pSMART2IF载体连接 | 第23-24页 |
| 1.2.6 制备电击感受态细胞DH5α | 第24-25页 |
| 1.2.7 连接产物的转化 | 第25页 |
| 1.2.8 初始文库滴度测定 | 第25页 |
| 1.2.9 文库插入片段长度检测与重组率检测 | 第25-26页 |
| 1.3 异黄酮合成酶(IFS)基因克隆 | 第26-33页 |
| 1.3.1 膜荚黄芪总RNA的提取 | 第26页 |
| 1.3.2 IFS基因cDNA末端快速扩增 | 第26-28页 |
| 1.3.3 IFS基因编码序列的扩增 | 第28-29页 |
| 1.3.4 PCR产物的T载体克隆 | 第29-31页 |
| 1.3.5 野生膜荚黄芪不定根的培养 | 第31页 |
| 1.3.6 IFS基因的表达特性分析 | 第31-33页 |
| 1.4 转IFS基因生菜 | 第33-37页 |
| 1.4.1 植物材料 | 第33页 |
| 1.4.2 主要基本培养基 | 第33-34页 |
| 1.4.3 IFS基因对生菜的遗传转化及抗性植株的筛选 | 第34-36页 |
| 1.4.4 转IFS基因生菜植株的检测 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-51页 |
| 2.1 野生膜荚黄芪cDNA文库构建 | 第37-38页 |
| 2.1.1 cDNA文库构建总RNA的提取 | 第37页 |
| 2.1.2 野生膜荚黄芪ds cDNA的纯化和分离 | 第37-38页 |
| 2.1.3 cDNA文库的质量评价 | 第38页 |
| 2.2 野生膜荚黄芪IFS基因全长的克隆 | 第38-41页 |
| 2.2.1 克隆IFS基因总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 膜荚黄芪IFS基因3'-RACE | 第39页 |
| 2.2.3 膜荚黄芪IFS基因5'-RACE | 第39-40页 |
| 2.2.4 膜荚黄芪IFS基因编码序列的克隆 | 第40-41页 |
| 2.3 野生膜荚黄芪IFS基因的生物信息学分析 | 第41-47页 |
| 2.3.1 膜荚黄芪IFS基因的全长cDNA序列 | 第41-43页 |
| 2.3.2 膜荚黄芪IFS基因的蛋白质序列分析 | 第43-47页 |
| 2.4 野生膜荚黄芪IFS基因的表达特性分析 | 第47-49页 |
| 2.4.1 野生膜荚黄芪叶片和不定根不同时期RNA的提取 | 第47-48页 |
| 2.4.2 不同时期IFS的半定量分析 | 第48-49页 |
| 2.5 转IFS基因生菜结果分析 | 第49-51页 |
| 2.5.1 植物表达载体的构建和鉴定 | 第49页 |
| 2.5.2 植物表达载体的农杆菌转化及鉴定 | 第49页 |
| 2.5.3 生菜的遗传转化 | 第49-50页 |
| 2.5.4 转基因生菜植株的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
