| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| 1.1 核黄素的性质、功能、用途和生产 | 第8-10页 |
| 1.2 B. subtilis 中核黄素生物合成途径 | 第10-11页 |
| 1.2.1 核黄素的生物合成途径 | 第10-11页 |
| 1.2.2 核黄素操纵子的结构 | 第11页 |
| 1.3 产核黄素 B. subtilis 工程菌的构建策略 | 第11-14页 |
| 1.3.1 诱变和基因组重排技术的运用 | 第11-12页 |
| 1.3.2 增强前体物的供应或削弱副产物的生成 | 第12-13页 |
| 1.3.3 过表达核黄素操纵子 | 第13-14页 |
| 1.3.4 其他的改造方法 | 第14页 |
| 1.4 甘油及其在 B. subtilis 中的代谢 | 第14-18页 |
| 1.5 适应性实验室进化 | 第18-20页 |
| 1.6 本课题的研究内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.1.5 培养基 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 枯草芽孢杆菌的 Spizizen 转化 | 第26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌质粒的提取 | 第27页 |
| 2.2.4 枯草芽孢杆菌基因组 DNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.5 PCR 体系 | 第28-29页 |
| 2.2.6 DNA 片段的纯化回收、酶切、去磷酸化和连接 | 第29-31页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2.2.8 适应性实验室进化 | 第32页 |
| 2.2.9 菌株的摇瓶发酵 | 第32页 |
| 2.2.10 发酵液中核黄素含量的测定 | 第32页 |
| 2.2.11 发酵液中甘油含量的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.12 无痕基因敲除和置换 | 第33-35页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第35-61页 |
| 3.1 BSU45 的适应性实验室进化 | 第35页 |
| 3.2 spc 基因的敲除 | 第35-38页 |
| 3.2.1 spc 敲除质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 BSU3-78-2 中 spc 的敲除 | 第37-38页 |
| 3.3 cyd 基因的敲除 | 第38-41页 |
| 3.3.1 cyd 基因敲除载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.3.2 BSUL1 中 cyd 基因的敲除 | 第41页 |
| 3.4 purFMNHD 的过表达 | 第41-44页 |
| 3.4.1 过表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.4.2 BSUL1 中 purFMNHD 的过表达 | 第44页 |
| 3.5 ywjH 的过表达 | 第44-48页 |
| 3.5.1 ywjH 过表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.5.2 BSUL1 中 ywjH 的过表达 | 第47-48页 |
| 3.6 zwf243 的过表达 | 第48-51页 |
| 3.6.1 zwf243 过表达载体的构建 | 第48-51页 |
| 3.6.2 BSUL1 中 zwf243 的过表达 | 第51页 |
| 3.7 gnd361 的过表达 | 第51-54页 |
| 3.7.1 gnd361 过表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.7.2 BSUL1 中 gnd361 的过表达 | 第53-54页 |
| 3.8 BSUL4 中核黄素操纵子的过表达 | 第54页 |
| 3.9 工程菌的发酵结果与分析 | 第54-61页 |
| 3.9.1 cyd 基因的敲除对菌株生产核黄素的影响 | 第54-56页 |
| 3.9.2 purFMNHD 过表达对菌株合成核黄素的影响 | 第56-57页 |
| 3.9.3 ywjH 基因的过表达对核黄素合成的影响 | 第57-58页 |
| 3.9.4 zwf243 和 gnd361 的过表达对核黄素合成的影响 | 第58-60页 |
| 3.9.5 核黄素操纵子的过表达对核黄素合成的影响 | 第60-61页 |
| 第四章 结论和展望 | 第61-63页 |
| 4.1 结论 | 第61页 |
| 4.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
