| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 脱卤酶简介 | 第12-19页 |
| 1.1.1 脱卤酶的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 卤代酸脱卤酶的结构及催化机理 | 第13-17页 |
| 1.1.3 脱卤酶的应用 | 第17-18页 |
| 1.1.4 脱卤酶的重组表达 | 第18-19页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第19-25页 |
| 1.2.1 毕赤酵母宿主菌 | 第20-21页 |
| 1.2.2 毕赤酵母载体 | 第21-22页 |
| 1.2.3 外源基因在毕赤酵母中的整合与表达 | 第22-24页 |
| 1.2.4 毕赤酵母表达系统的优化 | 第24-25页 |
| 1.2.5 毕赤酵母表达体系的局限性 | 第25页 |
| 1.3 本文的研究思路 | 第25-27页 |
| 第二章 2-氯丙酸脱卤酶在酵母中的外分泌表达 | 第27-60页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料和方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 质粒和菌种 | 第27-28页 |
| 2.2.2 工具酶、试剂与试剂盒 | 第28-29页 |
| 2.2.3 培养基及溶液配制 | 第29-31页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-59页 |
| 2.3.1 重组毕赤酵母外分泌表达体系的构建 | 第42-44页 |
| 2.3.2 重组毕赤酵母的功能筛选与PCR验证 | 第44-49页 |
| 2.3.3 重组脱卤酶蛋白的外分泌表达鉴定 | 第49-51页 |
| 2.3.4 毕赤酵母重组表达体系的优化 | 第51-53页 |
| 2.3.5 重组酶诱导酶活曲线 | 第53-55页 |
| 2.3.6 重组酶的遗传稳定性分析 | 第55-56页 |
| 2.3.7 重组酶GS115-DehⅡ-B2的酶学性质 | 第56-59页 |
| 2.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 2.4.1 脱卤酶在毕赤酵母中的重组表达与优化 | 第59页 |
| 2.4.2 脱卤酶的DehⅡ-B2的酶学性质 | 第59-60页 |
| 第三章 3-氯丙酸脱卤酶的可溶性表达 | 第60-77页 |
| 3.1 引言 | 第60页 |
| 3.2 材料与方法 | 第60-68页 |
| 3.2.1 质粒和菌种 | 第60-62页 |
| 3.2.2 工具酶、试剂与试剂盒 | 第62页 |
| 3.2.3 培养基及溶液配制 | 第62-63页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第63页 |
| 3.2.5 实验方法 | 第63-68页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第68-75页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第68-69页 |
| 3.3.2 重组载体的构建 | 第69-70页 |
| 3.3.3 重组载体的转化 | 第70-71页 |
| 3.3.4 重组脱卤酶的表达 | 第71-74页 |
| 3.3.5 重组酶的活力与蛋白表达量 | 第74-75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第四章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 4.1 结论 | 第77-78页 |
| 4.1.1 2-氯丙酸脱卤酶的外分泌重组表达 | 第77页 |
| 4.1.2 3-氯丙酸脱卤酶的过量可溶重组表达 | 第77-78页 |
| 4.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |