| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-24页 |
| 1.1 花生过敏免疫学机制 | 第11页 |
| 1.2 花生中主要过敏原Ara h2 | 第11-12页 |
| 1.3 加工对花生蛋白致敏性的影响 | 第12-14页 |
| 1.3.1 烘培 | 第12-13页 |
| 1.3.2 水煮 | 第13页 |
| 1.3.3 干炒 | 第13页 |
| 1.3.4 酶解 | 第13-14页 |
| 1.4 花生过敏原蛋白分离纯化方法 | 第14-17页 |
| 1.4.1 离子交换层析法 | 第14-15页 |
| 1.4.2 亲和层析 | 第15页 |
| 1.4.3 凝胶过滤层析 | 第15-16页 |
| 1.4.4 其他分离方法 | 第16-17页 |
| 1.5 免疫亲和层析 | 第17-22页 |
| 1.5.1 免疫亲和层析的原理 | 第17页 |
| 1.5.2 层析过程的动力学因素 | 第17-18页 |
| 1.5.3 免疫亲和层析的一般步骤 | 第18-21页 |
| 1.5.4 免疫亲和层析技术的应用 | 第21-22页 |
| 1.5.4.1 免疫纯化制备目标物质 | 第21页 |
| 1.5.4.2 免疫亲和检测 | 第21-22页 |
| 1.5.4.3 免疫亲和层析与其他技术联用 | 第22页 |
| 1.6 研究的目的、意义和研究内容 | 第22-24页 |
| 1.6.1 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 第2章 抗花生过敏原Ara h2 多克隆抗体的分离纯化 | 第24-38页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料与设备 | 第24-27页 |
| 2.2.1 试剂与材料 | 第24页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要溶液的配制 | 第25-27页 |
| 2.3 方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 天然Ara h2 蛋白及其抗兔血清的制备 | 第27-28页 |
| 2.3.2 以Ara h2 为配基进行免疫亲和层析柱的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.3 免疫亲和分离纯化Ara h2 多克隆抗体 | 第29页 |
| 2.3.4 考马斯亮蓝法测定分离纯化后蛋白浓度 | 第29页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE | 第29-30页 |
| 2.3.6 western-blotting鉴定抗体特异性 | 第30-31页 |
| 2.3.7 ELISA鉴定 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-36页 |
| 2.4.1 抗原蛋白Ara h2 的纯度及抗血清效价 | 第31-32页 |
| 2.4.2 亲和柱偶联率的测定 | 第32-33页 |
| 2.4.3 抗Ara h2 多克隆抗体的亲和层析 | 第33-35页 |
| 2.4.4 western-blotting结果分析 | 第35页 |
| 2.4.5 间接ELISA检测抗体 | 第35-36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-37页 |
| 2.6 小结 | 第37-38页 |
| 第3章 用于Ara h2 分离免疫亲和层析柱的制备及表征 | 第38-48页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与设备 | 第38-39页 |
| 3.2.1 试剂与材料 | 第38页 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 | 第38页 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 | 第38-39页 |
| 3.3 方法 | 第39-41页 |
| 3.3.1 抗Ara h2 抗体的处理 | 第39页 |
| 3.3.2 自制免疫亲和层析柱偶联时间、偶联率 | 第39-40页 |
| 3.3.3 最佳介质密度的确定 | 第40页 |
| 3.3.4 样品与柱材结合时间的确定 | 第40页 |
| 3.3.5 最大柱容量的确定 | 第40页 |
| 3.3.6 回收率的测定 | 第40-41页 |
| 3.3.7 亲和柱重复使用次数的测定 | 第41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.4.1 偶联时间 | 第41-42页 |
| 3.4.2 自制亲和柱偶联率及介质密度 | 第42-43页 |
| 3.4.3 免疫亲和层析柱柱容量 | 第43页 |
| 3.4.4 免疫亲和层析柱回收率 | 第43-44页 |
| 3.4.5 免疫亲和层析柱使用次数 | 第44-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5.1 基质的选择及偶联 | 第45页 |
| 3.5.2 柱容量及稳定性 | 第45-46页 |
| 3.6 小结 | 第46-48页 |
| 第4章 分离热加工和酶解花生产物中Ara h2 及其衍生物 | 第48-62页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料与设备 | 第48-50页 |
| 4.2.1 试剂与材料 | 第48页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第48页 |
| 4.2.3 主要溶液的配制 | 第48-50页 |
| 4.3 方法 | 第50-53页 |
| 4.3.1 水煮处理花生粗提液 | 第50页 |
| 4.3.2 体外模拟胃液及肠液消化 | 第50页 |
| 4.3.3 免疫亲和纯化操作 | 第50-51页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE | 第51页 |
| 4.3.5 Tricine-SDS-PAGE | 第51-52页 |
| 4.3.6 间接竞争ELISA法测定亲和层析提取率 | 第52-53页 |
| 4.3.7 western-blotting鉴定抗体特异性 | 第53页 |
| 4.4 结果与分析 | 第53-60页 |
| 4.4.1 样品的处理 | 第53-55页 |
| 4.4.2 免疫亲和层析洗脱曲线 | 第55-56页 |
| 4.4.3 ELISA测定提取率 | 第56-57页 |
| 4.4.4 western-blotting结果分析 | 第57-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60-61页 |
| 4.6 小结 | 第61-62页 |
| 第5章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 硕士期间研究成果 | 第71页 |
