| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 乳酸菌及其益生功能 | 第12-13页 |
| 1.1.1 乳酸菌的分类及分布 | 第12-13页 |
| 1.1.2 乳酸菌的益生功能 | 第13页 |
| 1.2 乳酸菌质粒载体 | 第13-14页 |
| 1.3 乳酸菌启动子 | 第14-15页 |
| 1.3.1 乳酸菌启动子的特性 | 第14页 |
| 1.3.2 乳酸菌启动子的类型 | 第14-15页 |
| 1.4 启动子预测软件的应用 | 第15页 |
| 1.5 报告基因的应用 | 第15-16页 |
| 1.6 功能基因组学在乳酸菌基因组表达研究中的应用 | 第16-17页 |
| 1.6.1 基因芯片技术 | 第16-17页 |
| 1.6.2 EST分析技术 | 第17页 |
| 1.6.3 表达分析方法 | 第17页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 质粒与菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 抗体制剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要生物学试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19页 |
| 2.1.6 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-34页 |
| 2.2.1 干酪乳杆菌高表达基因的筛选 | 第20-21页 |
| 2.2.2 启动子的预测 | 第21-22页 |
| 2.2.3 重组克隆载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.4 重组pMD19-T-EGFP载体的构建与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组pMD19-T-P342EGFP载体的构建与鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.6 重组干酪乳杆菌表达系统构建 | 第26-29页 |
| 2.2.7 重组干酪乳杆菌表达蛋白的Western blot鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.8 表达产物的激光共聚焦显微镜检测 | 第30页 |
| 2.2.9 组成型启动子的转录与表达效果 | 第30-32页 |
| 2.2.10 启动子的截短 | 第32-34页 |
| 3 结果 | 第34-46页 |
| 3.1 干酪乳杆菌组成型高效表达基因的筛选 | 第34页 |
| 3.2 报告基因EGFP的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.1 EGFP的PCR扩增 | 第34页 |
| 3.2.2 重组质粒pMD19-T-EGFP酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.3 重组质粒p MD19-T-P342EGFP酶切鉴定结果 | 第35页 |
| 3.4 重组表达载体p PG-P342EGFP、p PG-P776EGFP、p PG-T7g10-EGFP的鉴定结果 | 第35-37页 |
| 3.5 重组干酪乳杆菌的鉴定结果 | 第37页 |
| 3.6 重组干酪乳杆菌表达蛋白的Western blot鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.7 靶标蛋白表达的激光共聚焦显微镜检测结果 | 第38-39页 |
| 3.8 启动子启动效果的分析 | 第39-43页 |
| 3.8.1 报告基因EGFP转录水平的相对定量PCR检测结果 | 第39-40页 |
| 3.8.2 三种重组菌表达靶标蛋白EGFP的相对定量检测 | 第40-41页 |
| 3.8.3 靶标蛋白EGFP表达的流式细胞术检测结果 | 第41页 |
| 3.8.4 不同培养时间靶标蛋白EGFP的表达效果检测 | 第41-42页 |
| 3.8.5 不同碳源中重组菌的表达稳定性检测结果 | 第42-43页 |
| 3.9 重组干酪乳杆菌pPG-P48EGFP、p PG-P180EGFP的构建 | 第43-46页 |
| 3.9.1 P48EGFP的PCR扩增 | 第43页 |
| 3.9.2 重组表达载体pPG-P48EGFP、p PG-P180EGFP的鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.9.3 重组干酪乳杆菌质粒p PG-P48EGFP、pPG-P180EGFP鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.9.4 截短后重组干酪乳杆菌表达蛋白的Western blot鉴定结果 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 乳酸菌组成型启动子的筛选 | 第46-47页 |
| 4.2 组成型启动子启动效果的分析 | 第47页 |
| 4.3 荧光定量PCR方法的应用 | 第47-48页 |
| 4.4 干酪乳杆菌丙酮酸水合酶启动子的应用与展望 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第56页 |
