| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| ·鱼用基因疫苗 | 第12页 |
| ·鱼用基因疫苗的构建 | 第12-14页 |
| ·抗原基因的选择 | 第12-13页 |
| ·共价血清的免疫筛选 | 第13页 |
| ·表达文库免疫筛选法(LE)I | 第13页 |
| ·其他筛选方法 | 第13页 |
| ·载体的选择 | 第13-14页 |
| ·佐剂的选择 | 第14-15页 |
| ·油佐剂 | 第14页 |
| ·细胞因子 | 第14页 |
| ·CpG-ODNs的免疫刺激作用 | 第14-15页 |
| ·DNA疫苗作用机理及免疫评估 | 第15-16页 |
| ·DNA疫苗作用机理 | 第15-16页 |
| ·DNA疫苗免疫效果评估 | 第16页 |
| ·鱼类DNA疫苗的接种方式 | 第16-17页 |
| ·注射法 | 第16页 |
| ·基因枪法 | 第16-17页 |
| ·浸泡法 | 第17页 |
| ·DNA疫苗的优缺点 | 第17-18页 |
| ·生物安全 | 第18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| 第二章 pVAX1-25和pVAX1-47基因疫苗重组质粒的构建 | 第19-30页 |
| ·材料和方法 | 第19-25页 |
| ·病毒模板来源 | 第19页 |
| ·抗原基因的筛选 | 第19页 |
| ·pMD18-T-TRBIV质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·TRBIV-25R和TRBIV-47R的PCR扩增 | 第20-22页 |
| ·pVAX1-25和pVAX1-47重组质粒的构建与扩增 | 第22-25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·抗原基因筛选 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·TRBIV 25R和47R的扩增结果 | 第25-26页 |
| ·pVAX1质粒载体的提取 | 第26页 |
| ·TRBIV 25R和47R以及pVAX1质粒的酶切、纯化及定量 | 第26-27页 |
| ·pVAX1-25R和pVAX1-47R重组质粒的提取及酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·pVAX1-25R和pVAX1-47R的测序结果 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 pVAX1-25和pVAX1-47在细胞和鱼体内的表达研究 | 第30-39页 |
| ·材料和方法 | 第30-33页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·pVAX1-25R和pVAX1-47R在细胞水平的表达研究 | 第30-32页 |
| ·pVAX1-25R和pVAX1-47R在鱼体内的表达研究 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·细胞水平上的RT-PCR和PCR检测结果 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR检测pVAX1-25R和pVAX1-47R在鱼体内的表达 | 第34-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 核酸疫苗pVAX1-47免疫效果评价 | 第39-44页 |
| ·材料和方法 | 第39页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·cDNA的制备 | 第39页 |
| ·荧光定量检测IgM基因的变化 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 基因疫苗安全性评价 | 第44-47页 |
| ·材料和方法 | 第44-45页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·各组实验鱼的生理观察 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-46页 |
| ·pVAX1-47R和pVAX1的检测 | 第45-46页 |
| ·生理观察 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第六章 石斑鱼源致病性假交替单胞菌的分离鉴定及药敏特性 | 第47-57页 |
| ·材料和方法 | 第47-49页 |
| ·试验鱼 | 第47页 |
| ·细菌的分离与纯化 | 第47页 |
| ·人工感染试验 | 第47-48页 |
| ·病原菌毒力的测定 | 第48页 |
| ·纯化菌株的生理生化鉴定 | 第48页 |
| ·16S rDNA序列测定及分析 | 第48页 |
| ·药物敏感试验 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·致病菌的分离及毒力的测定 | 第49-50页 |
| ·病原菌的鉴定 | 第50-52页 |
| ·药敏试验结果 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第七章 沙虎鲨致死病因的分析及鉴定 | 第57-66页 |
| ·材料和方法 | 第57-59页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57页 |
| ·组织观察 | 第57-58页 |
| ·细菌的分离与纯化 | 第58页 |
| ·人工感染实验 | 第58页 |
| ·16S rDNA序列测定及分析 | 第58页 |
| ·药物敏感试验 | 第58-59页 |
| ·组织DNA和RNA的提取 | 第59页 |
| ·病毒检测 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-64页 |
| ·致病菌的分离及毒力的测定 | 第59页 |
| ·病原菌的鉴定 | 第59-60页 |
| ·药敏试验结果 | 第60-62页 |
| ·病毒检测结果 | 第62-63页 |
| ·组织观察 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
