| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 口蹄疫概述 | 第12-13页 |
| 1.2 口蹄疫病毒结构蛋白VP1功能 | 第13-14页 |
| 1.3 口蹄疫的检测方法 | 第14-16页 |
| 1.4 口蹄疫单克隆抗体国内外的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 病毒、蛋白抗原及血清 | 第19页 |
| 2.1.2 载体和菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.6 耗材和仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-35页 |
| 2.2.1 口蹄疫A型VP1基因的蛋白原核表达 | 第22-28页 |
| 2.2.2 口蹄疫A型VP1蛋白单克隆抗体的制备 | 第28-33页 |
| 2.2.3 单抗竞争ELISA诊断方法的初步建立 | 第33-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-63页 |
| 3.1 口蹄疫A型VP1基因的蛋白原核表达 | 第35-43页 |
| 3.1.1 VP1基因PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| 3.1.2 重组表达载体PET-32a-VPl/pGEX-6p-1-VP1的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.3 重组菌的融合表达结果 | 第37-38页 |
| 3.1.4 重组菌表达条件的优化 | 第38-41页 |
| 3.1.5 融合蛋白可溶性分析 | 第41页 |
| 3.1.6 融合蛋白柱层析纯化结果 | 第41-42页 |
| 3.1.7 融合蛋白Western-blot检测 | 第42-43页 |
| 3.2 口蹄疫A型VP1蛋白单克隆抗体的制备 | 第43-54页 |
| 3.2.1 间接ELISA方法建立 | 第43-44页 |
| 3.2.2 免疫小鼠效价的测定 | 第44页 |
| 3.2.3 细胞形态观察 | 第44-46页 |
| 3.2.4 细胞融合结果 | 第46-47页 |
| 3.2.5 杂交瘤细胞克隆化培养 | 第47页 |
| 3.2.6 单抗培养上清测定 | 第47-48页 |
| 3.2.7 单抗腹水纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.8 单抗腹水效价的测定 | 第49-50页 |
| 3.2.9 杂交瘤细胞株稳定性鉴定 | 第50页 |
| 3.2.10 杂交瘤细胞株染色体分析 | 第50-51页 |
| 3.2.11 单抗亚型的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.2.12 单抗相对亲和力及饱和度测定 | 第52页 |
| 3.2.13 单抗抗原表位分析结果 | 第52页 |
| 3.2.14 单抗阻断ELISA分析 | 第52-53页 |
| 3.2.15 单抗western blot检测 | 第53-54页 |
| 3.3 单抗竞争ELISA诊断方法的初步建立 | 第54-63页 |
| 3.3.1 最佳反应条件的确定 | 第54-60页 |
| 3.3.2 阴阳临界值的确定 | 第60-61页 |
| 3.3.3 特异性试验结果 | 第61页 |
| 3.3.4 重复性试验结果 | 第61-62页 |
| 3.3.5 与液相阻断ELISA试剂盒比较结果 | 第62-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-68页 |
| 4.1 蛋白原核表达 | 第63-64页 |
| 4.2 单克隆抗体制备 | 第64-67页 |
| 4.2.1 抗原 | 第64-65页 |
| 4.2.2 细胞融合 | 第65-66页 |
| 4.2.3 单抗生物特性的鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3 单抗竞争ELISA方法建立 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第77页 |