| 缩略词表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 概述 | 第10-11页 |
| 1.2 糖基转移酶研究进展 | 第11-19页 |
| 1.2.1 糖基转移酶研究概况 | 第11-13页 |
| 1.2.2 天然产物糖基化反应在生物体中的作用 | 第13页 |
| 1.2.3 糖基转移酶的底物 | 第13-19页 |
| 1.3 UDP-糖基供体生物合成途径的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 UDP-葡萄糖的来源 | 第19页 |
| 1.3.2 由UDP-葡萄糖到UDP-阿拉伯糖的生物合成途径 | 第19-20页 |
| 1.3.3 UDP-糖生物合成途径中的差向异构酶 | 第20-21页 |
| 1.3.4 UDP-鼠李糖的生物合成途径 | 第21-22页 |
| 1.4 总结 | 第22-23页 |
| 第二章 实验所用材料及常规方法 | 第23-35页 |
| 2.1 主要仪器设备及生产厂家 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 标准品及常用试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 常见溶液配方 | 第25-27页 |
| 2.3 植物材料 | 第27页 |
| 2.4 抗生素的配制 | 第27-28页 |
| 2.5 试剂盒及酶等生化试剂 | 第28页 |
| 2.6 菌株及质粒 | 第28页 |
| 2.7 常用实验方法 | 第28-35页 |
| 2.7.1 感受态制备方法(CaCl_2法) | 第28-29页 |
| 2.7.2 克隆载体连接 | 第29页 |
| 2.7.3 大肠杆菌的转化 | 第29页 |
| 2.7.4 重组子的筛选 | 第29-30页 |
| 2.7.5 重组蛋白的诱导 | 第30页 |
| 2.7.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第30-31页 |
| 2.7.7 蛋白染色 | 第31页 |
| 2.7.8 蛋白纯化、透析及冷干 | 第31-32页 |
| 2.7.9 Western-Blot方法 | 第32页 |
| 2.7.10 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.7.11 毕赤酵母电转化方法 | 第33-34页 |
| 2.7.12 毕赤酵母高拷贝整合型转化子的筛选 | 第34页 |
| 2.7.13 毕赤酵母重组菌的保菌方法 | 第34页 |
| 2.7.14 外源基因在毕赤酵母GS115中的诱导表达 | 第34-35页 |
| 第三章 UDP-木糖合成酶、UDP-芹菜糖木糖合成酶的克隆与功能研究 | 第35-66页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-48页 |
| 3.2.1 虎眼万年青中UXS与UAXS的克隆及生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.2.2 UXS与UAXS重组蛋白的表达和功能分析 | 第39-40页 |
| 3.2.3 蛋白催化及催化产物分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 OcUXS与OcUAXS的酶学性质分析 | 第41-43页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR进行组织表达分析 | 第43-44页 |
| 3.2.6 OcUXS与OcUAXS的NAD~+结合区域的定点突变 | 第44页 |
| 3.2.7 所用引物与菌株 | 第44-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-65页 |
| 3.3.1 UXS与UAXS cDNA的克隆 | 第48页 |
| 3.3.2 OcUXS和OcUAXS的生物信息学分析 | 第48-51页 |
| 3.3.3 OcUXS和OcUAXS重组蛋白检测结果 | 第51-54页 |
| 3.3.4 OcUXS和OcUAXS重组蛋白催化产物确定 | 第54-59页 |
| 3.3.5 OcUXS和OcUAXS重组蛋白酶学性质分析结果 | 第59-63页 |
| 3.3.6 OcUXS和OcUAXS组织表达特异性分析结果 | 第63-65页 |
| 3.4 本章总结 | 第65-66页 |
| 第四章 UDP-木糖差向异构酶、UDP-葡萄糖差向异构酶的克隆与功能研究 | 第66-92页 |
| 4.1 引言 | 第66-68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-77页 |
| 4.2.1 虎眼万年青中UXE与UGE的克隆及生物信息学分析 | 第68-70页 |
| 4.2.2 UGE与UXE重组蛋白的表达和功能分析 | 第70-71页 |
| 4.2.3 蛋白催化及催化产物分析 | 第71-73页 |
| 4.2.4 OcUGE与OcUXE的酶学性质分析 | 第73-75页 |
| 4.2.5 荧光定量PCR进行组织表达分析 | 第75页 |
| 4.2.6 所用引物与菌株 | 第75-77页 |
| 4.3 实验结果 | 第77-90页 |
| 4.3.1 UGE与UXE cDNA的克隆 | 第77-78页 |
| 4.3.2 OcUGE和OcUXE的生物信息学分析 | 第78-80页 |
| 4.3.3 OcUGE和OcUXE重组蛋白检测结果 | 第80-81页 |
| 4.3.4 OcUGE和OcUXE重组蛋白催化产物确定 | 第81-85页 |
| 4.3.5 OcUGE重组蛋白酶学性质分析结果 | 第85-88页 |
| 4.3.6 OcUGE和OcUXE组织表达特异性分析结果 | 第88-90页 |
| 4.4 本章总结 | 第90-92页 |
| 第五章 UDP-鼠李糖生物合成途径中关键酶的研究 | 第92-106页 |
| 5.1 引言 | 第92-93页 |
| 5.2 实验方法 | 第93-97页 |
| 5.2.1 虎眼万年青中RHM与NRS/ER的克隆及生物信息学分析 | 第93-94页 |
| 5.2.2 RHM、NRS/ER、RHM氮端重组蛋白的表达和功能分析 | 第94页 |
| 5.2.3 蛋白催化及催化产物分析 | 第94-95页 |
| 5.2.4 OcRHM的酶学性质分析 | 第95页 |
| 5.2.5 所用引物与菌株 | 第95-97页 |
| 5.3 实验结果 | 第97-105页 |
| 5.3.1 RHM、NRS/ER的克隆 | 第97页 |
| 5.3.2 RHM、NRS/ER、RHM氮端重组蛋白检测结果 | 第97-98页 |
| 5.3.3 OcRHM1、OcNER1、OcRHM1-N重组蛋白催化产物确定 | 第98-103页 |
| 5.3.4 OcRHM重组蛋白酶学性质分析结果 | 第103-105页 |
| 5.4 本章总结 | 第105-106页 |
| 第六章 UDP-葡萄糖醛酸差向异构酶的克隆与功能研究 | 第106-117页 |
| 6.1 引言 | 第106页 |
| 6.2 实验方法 | 第106-111页 |
| 6.2.1 虎眼万年青中GlcAE的克隆及生物信息学分析 | 第106-107页 |
| 6.2.2 GlcAE重组蛋白的表达和功能分析 | 第107-108页 |
| 6.2.3 蛋白催化及催化产物分析 | 第108-109页 |
| 6.2.4 所用引物与菌株 | 第109-111页 |
| 6.3 实验结果 | 第111-116页 |
| 6.3.1 OcGlcAE的克隆 | 第111页 |
| 6.3.2 OcGlcAE1/2/3重组蛋白原核检测结果 | 第111-113页 |
| 6.3.3 OcGlcAE1/2/3重组蛋白真核表达结果 | 第113-114页 |
| 6.3.4 OcGlcAE重组蛋白活性检测结果 | 第114-116页 |
| 6.4 本章总结 | 第116-117页 |
| 第七章 虎眼万年青中糖基转移酶的克隆与功能研究 | 第117-148页 |
| 7.1 引言 | 第117页 |
| 7.2 实验方法 | 第117-122页 |
| 7.2.1 虎眼万年青中糖基转移酶克隆及生物信息学分析 | 第117-119页 |
| 7.2.2 OcUGT1/2/3重组蛋白的表达和功能分析 | 第119页 |
| 7.2.3 蛋白催化及催化产物分析 | 第119-121页 |
| 7.2.4 OcUGT的酶学性质分析 | 第121页 |
| 7.2.5 所用引物与菌株 | 第121-122页 |
| 7.3 实验结果 | 第122-147页 |
| 7.3.1 虎眼万年青中糖基转移酶的克隆 | 第122-123页 |
| 7.3.2 构建基因表达载体 | 第123-126页 |
| 7.3.3 蛋白诱导表达及检测 | 第126-128页 |
| 7.3.4 生物信息学分析 | 第128-130页 |
| 7.3.5 OcUGT1的功能研究 | 第130-141页 |
| 7.3.6 OcUGT2的功能研究 | 第141-143页 |
| 7.3.7 OcUGT3的功能研究 | 第143-144页 |
| 7.3.8 OcUGT1/2的酶学性质分析 | 第144-146页 |
| 7.3.9 OcUGT1/2植物组织表达分析 | 第146-147页 |
| 7.4 本章总结 | 第147-148页 |
| 第八章 全文总结 | 第148-150页 |
| 8.1 主要内容 | 第148-149页 |
| 8.2 论文创新点 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-156页 |
| 附录Ⅰ 核磁与质谱 | 第156-190页 |
| 附录Ⅱ 序列信息 | 第190-199页 |
| 致谢 | 第199-201页 |
| 个人简历 | 第201页 |
