| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩写表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 肺癌研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 血浆游离DNA应用肺癌研究 | 第14-16页 |
| 1.3 微滴式数字PCR技术 | 第16-21页 |
| 1.3.1 数字PCR技术发展史 | 第16-17页 |
| 1.3.2 数字PCR技术介绍及与其他技术比较 | 第17-18页 |
| 1.3.3 数字PCR技术的四种平台 | 第18-19页 |
| 1.3.4 数字PCR应用 | 第19-21页 |
| 1.4 研究的意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第23-44页 |
| 2.1 主要试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验样本 | 第23页 |
| 2.2.1 测试样本 | 第23页 |
| 2.2.2 临床样本 | 第23页 |
| 2.3 实验设备 | 第23-24页 |
| 2.4 样本准备 | 第24-28页 |
| 2.4.1 对照品制备YH细胞的DNA提取 | 第24页 |
| 2.4.2 血浆游离DNA提取（血浆分离） | 第24-26页 |
| 2.4.3 组织样本提取 | 第26-27页 |
| 2.4.4 质控品的制备 | 第27-28页 |
| 2.5 引物及探针的设计 | 第28-31页 |
| 2.5.1 引物的设计 | 第28页 |
| 2.5.2 探针的设计 | 第28-29页 |
| 2.5.3 引物及探针的设计原则 | 第29-31页 |
| 2.6 QPCR染料法及探针法实验流程 | 第31-34页 |
| 2.6.1 采用Q-PCR染料法（SYBR-GREEN）测试 | 第31-34页 |
| 2.6.2 Q-PCR（探针法）测试流程 | 第34页 |
| 2.7 五个位点探针的筛选过程 | 第34-40页 |
| 2.7.1 EGFR18探针筛选过程 | 第34-36页 |
| 2.7.2 EGFR19探针筛选过程 | 第36-37页 |
| 2.7.3 EGFR20探针筛选过程 | 第37-38页 |
| 2.7.4 EGFR21探针筛选过程 | 第38-40页 |
| 2.7.5 KRAS探针筛选过程 | 第40页 |
| 2.8 DDPCR检测过程 | 第40页 |
| 2.8.1 按照如下流程进行DDPCR检测 | 第40页 |
| 2.9 下机数据分析流程 | 第40-44页 |
| 2.9.1 EGFR18/EGFR19/KRAS信息分析流程 | 第40-42页 |
| 2.9.2 EGFR20/EGFR21信息分析流程 | 第42-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-58页 |
| 3.1 引物测试结果 | 第44-46页 |
| 3.1.1 引物的特异性与扩增效果 | 第44页 |
| 3.1.2 退火温度选择 | 第44-46页 |
| 3.2 探针测试结果 | 第46-47页 |
| 3.3 反应酶、缓冲液 | 第47-48页 |
| 3.4 引物浓度 | 第48-49页 |
| 3.5 探针浓度 | 第49-50页 |
| 3.6 最终体系确定 | 第50页 |
| 3.7 反应条件 | 第50-53页 |
| 3.7.1 退火/延伸温度 | 第51页 |
| 3.7.2 变性时间 | 第51-52页 |
| 3.7.3 退火/延伸时间 | 第52-53页 |
| 3.8 标准品及临床样本验证 | 第53-58页 |
| 3.8.1 检出限 | 第53页 |
| 3.8.2 准确性 | 第53页 |
| 3.8.3 敏感性 | 第53-57页 |
| 3.8.4 临床样本验证结果 | 第57-58页 |
| 第四章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 4.1 结论 | 第58-59页 |
| 4.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附件 | 第71页 |
